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我想做Fe3+的金属螯合层析，请问怎么做呢? 已有1人参与
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| 我想表达一个蛋白，这个蛋白可以结合Fe3+，所以不用Ni-金属螯合层析，而改用Fe3+，请问这个怎么做呢？是否只要保证在合适的pH下，让Fe3+充分与柱材料结合就可以了呢？我准备用FeCl3. |
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3楼2014-11-19 20:19:09
pennchem
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【答案】应助回帖
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gyesang: 金币+4, 鼓励交流！ 2014-11-07 22:17:03
xissy: 金币+5, ★★★很有帮助, 我已经做了Fe(III)的金属螯合了，结果是1.Fe(III)不仅可以和咪唑竞争性结合目的蛋白(可以用咪唑除杂，洗脱)；Fe(III)自身也可以结合目的蛋白(这个蛋白可以与Fe(III)结合)，因此最后用500mM的咪唑洗脱完后，再用EDTA也可以洗下近乎一般的目的蛋白。但是现在有个问题，用EDTA洗脱的目的蛋白因为含有Fe(III)而有黄色。我想如果可以去除Fe(III)就好了。不知道您有什么好建议。 2014-11-18 21:18:54
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gyesang: 金币+4, 鼓励交流！ 2014-11-07 22:17:03
xissy: 金币+5, ★★★很有帮助, 我已经做了Fe(III)的金属螯合了，结果是1.Fe(III)不仅可以和咪唑竞争性结合目的蛋白(可以用咪唑除杂，洗脱)；Fe(III)自身也可以结合目的蛋白(这个蛋白可以与Fe(III)结合)，因此最后用500mM的咪唑洗脱完后，再用EDTA也可以洗下近乎一般的目的蛋白。但是现在有个问题，用EDTA洗脱的目的蛋白因为含有Fe(III)而有黄色。我想如果可以去除Fe(III)就好了。不知道您有什么好建议。 2014-11-18 21:18:54
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说个我的理解，以下几个问题 （1）Fe3+结合在蛋白的什么地方，是在蛋白里面，还是外面 （2）Ni(II)柱结合组氨酸的N，但是Fe3+更倾向O，S （3）6XHistag螯合Ni（II），可逆结合洗脱的原因是，Ni柱子基质螯合Ni是不饱和的，正是没有饱和的部分才可以螯合6XHis里N，然后不同浓度的咪唑，可以竞争性的把目的蛋白洗下来 限于本人的理解，目前金属螯合柱，金属可选的有Ni（II）， Co（II）， Cu（II）， Zn（II），很容易发现都是第一排的过渡态金属，而且是二价的，而且没有Fe（II）（因为它很容易氧化成Fe（III））。 |
2楼2014-11-07 21:53:16
4楼2014-11-20 16:20:48
pennchem
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5楼2014-11-21 20:25:54
