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王丹523

铁虫 (小有名气)

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[求助] 打算做qpcr 遇到一些问题希望大家看一看已有3人参与

我有五个基因，如果我用一个模板这样去做qpcr。我不太懂溶解曲线和扩增曲线的原理。
所以我是每次做一个基因，跑一次能同时得到溶解曲线和扩增曲线？还是能够五个基因一起跑。
我不知道溶解曲线和扩增曲线是分别跑出来的还是一次跑出来的。
机子是abi7500。用的syber green takara的。

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帮我看看这个溶解qPCR曲线已经有6人回复

1楼 2014-11-05 12:00:00

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disuta

新虫 (初入文坛)

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【答案】应助回帖

设置不同浓度梯度做标准曲线是为了检测引物的扩增效率，看看适不适合做定量，相关系数一般要求达到0.99，扩增效率在90%~110%之间可以用2-△△的方法计算相对表达量，扩增效率超出这个范围就得用矫正的方法计算了。不过看到现在发表的很多文章，对做标准曲线没要求。
另外，只要能放得下，多少对引物都可以一起做

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