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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » PCR 一般常识 中的疑问
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wedyy0610

木虫 (职业作家)

老小孩

[交流] PCR 一般常识 中的疑问

各位分子高手，我对于分子这方面的知识懂的很少，有几个问题向问问大家，我先谢谢各位老师了
1.关于PCR程序问题
94度 5：00
94度 1：00
引物54度 0：45
72度 0：45
goto step2 35循环
72度 10：00
不明白为红色标记，为什么是这个温度 或者为什么设定这个时间？
2.半定量——PCR 的英文缩写是什么 ?
意义是什么？
3.关于PCR 体系什么是可以变化的
Taq E 一般用量是不是不变 做半定量时
谢谢各位高手
在丁香园 请教过，没人搭理～～～
谢谢每位回帖的虫子～～
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老了，蹦跶不几年了
1楼 2008-05-09 08:32:12
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七月的苹果

铜虫 (小有名气)
摸条件主要是改变退火文，针对PCR产物效果好坏而定。Tm对于设定PCR退火温度是必需的。退火温度一般设定为比引物的Tm低5℃的温度。合理的退火温度为42-70℃。在理想状态下，退火温度应足够低，以保证引物同目的序列有效退火，同时还要足够高，以减少非特异性结合
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6楼2008-05-09 21:28:33
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辛雨237

铁杆木虫 (著名写手)
时间并不是确定不变的，是可以根据情况改变的，就要看你是做什么了
酶也是根据各个公司而有变化的，因为每个公司的酶浓度是不一样的
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春暖花开
2楼2008-05-09 08:42:29
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七月的苹果

铜虫 (小有名气)
★
lixiaoyi1981(金币+1,VIP+0):如果说说摸条件的步骤就好了。谢谢你的解答。
1、温度和时间是可以变的，所以一般都先摸条件
2、半定量PCR：Semi-Quantitative RT-PCR
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3楼2008-05-09 08:54:05
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pph0259

木虫 (正式写手)
★ ★
lixiaoyi1981(金币+2,VIP+0):不错，谢谢哦。以后常来转转。
楼上是菜鸟啊，我来回答吧，
退火温度下是引物挂模板，不一定要45s，30s也可以，这个速度很快的，但长几秒也没关系；
72°是引物延伸，这个时间比较重要，一般根据你扩增片段大小决定，一般是1kb-1min。但通常这个时间也是足够足够的！
最后的72° 10min是经验值，相当于让最后的延伸好好延伸一番，是保险数值，不需要作特别考虑。
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4楼2008-05-09 10:03:11
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