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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 干扰/敲除 » Crispr/Cas9 基因敲除：有限稀释法（单克隆挑选）
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myyounger

至尊木虫 (文坛精英)
★
pypsak(金币+1): 谢谢参与
路过顺便顶一下 祝楼主一切顺利！
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52楼2014-11-05 18:32:46
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夏至1990

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
有没有卡在这一块的，交流下吧，1016902450:hand::cry::cry::cry::cry::cry::cry::cry::cry::cry::cry::cry::cry::cry::cry::cry::cry::cry::cry::cry::cry::cry::cry::cry::cry::cry::cry::cry::cry::cry::cry::cry::cry:
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53楼2014-11-05 18:55:18
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pypsak

金虫 (正式写手)
大家做的时候有没有什么问题探讨一下呢？
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54楼2014-11-06 09:21:23
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pypsak

金虫 (正式写手)
引用回帖:
53楼: Originally posted by 夏至1990 at 2014-11-05 18:55:18
有没有卡在这一块的，交流下吧，1016902450:hand::cry::cry::cry::cry::cry::cry::cry::cry::cry::cry::cry::cry::cry::cry::cry::cry::cry::cry::cry::cry::cry::cry::cry::cry::cry::cry::cry::cry::cry::cry::cr ...

你是卡在哪了？
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55楼2014-11-06 09:21:39
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夏至1990

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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55楼: Originally posted by pypsak at 2014-11-06 09:21:39
你是卡在哪了？...

筛选时候，阳性细胞剩余非常少，对照阴性细胞死完，阳性细胞基本也死完了，不知道该怎么搞了，是确保阳性细胞还在的时候，不加抗生素，让它涨起来，然后是有限稀释。还是直接消化挑单克隆，这样细胞会不会死亡完啊，我想稳筛，求指导1016902450
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56楼2014-11-06 11:22:58
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小苹果168

银虫 (小有名气)
感谢楼主分享

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57楼2014-11-06 11:27:01
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zaijie24

新虫 (初入文坛)
这个不错
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58楼2014-11-09 19:09:13
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pypsak

金虫 (正式写手)
引用回帖:
56楼: Originally posted by 夏至1990 at 2014-11-06 11:22:58
筛选时候，阳性细胞剩余非常少，对照阴性细胞死完，阳性细胞基本也死完了，不知道该怎么搞了，是确保阳性细胞还在的时候，不加抗生素，让它涨起来，然后是有限稀释。还是直接消化挑单克隆，这样细胞会不会死亡 ...

你是做药杀的时候阳性阴性全死完了？有没有试过转个GFP看看转染效率呢，或者摸好药杀条件。
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59楼2014-11-10 08:58:01
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饿的神啊

新虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
只用于动物细胞克隆吗？植物细胞可不可以啊
粉红色是不是就是不是单克隆啊
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60楼2014-11-10 09:47:52
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pypsak

金虫 (正式写手)
引用回帖:
60楼: Originally posted by 饿的神啊 at 2014-11-10 09:47:52
只用于动物细胞克隆吗？植物细胞可不可以啊
粉红色是不是就是不是单克隆啊

植物细胞一般都是愈伤组织或者原生质体了，没必要单克隆了
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61楼2014-11-10 11:09:36
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夏至1990

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
59楼: Originally posted by pypsak at 2014-11-10 08:58:01
你是做药杀的时候阳性阴性全死完了？有没有试过转个GFP看看转染效率呢，或者摸好药杀条件。...

转染效率10%，应该算是最高的了，目前在优化药杀条件
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62楼2014-11-10 11:44:10
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pypsak

金虫 (正式写手)
引用回帖:
62楼: Originally posted by 夏至1990 at 2014-11-10 11:44:10
转染效率10%，应该算是最高的了，目前在优化药杀条件...

转染效率10%太低了，基本上我们低于30%就不会做了，或者换转染方式了，你是淋巴细胞或者血液型细胞？
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63楼2014-11-11 09:28:46
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夏至1990

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
63楼: Originally posted by pypsak at 2014-11-11 09:28:46
转染效率10%太低了，基本上我们低于30%就不会做了，或者换转染方式了，你是淋巴细胞或者血液型细胞？...

自己的细胞，没办法啊，哭都哭不出来
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64楼2014-11-12 08:35:02
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bluelilysky

木虫 (小有名气)
????
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66楼2015-01-12 08:49:35
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小刀188

金虫 (正式写手)
八错八错
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68楼2015-02-03 08:46:31
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生物菜鸟

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
请问您用的是张峰的文库做的吗

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71楼2018-05-21 17:12:13
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简单回复
abatis51楼
2014-11-05 18:25   回复  
pypsak(金币+1): 谢谢参与
支持
马儿傻傻思65楼
2015-01-06 14:42   回复  
pypsak67楼
2015-01-22 11:21   回复  
浅语890569楼
2015-02-03 08:55   回复  
ttxs9970楼
2015-04-07 19:35   回复  
送红花一朵
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