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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 干扰/敲除 » Crispr/Cas9 基因敲除：有限稀释法（单克隆挑选）
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pypsak

金虫 (正式写手)

[交流] Crispr/Cas9 基因敲除：有限稀释法（单克隆挑选）

做细胞的基因敲除，工作量最大的应该就是转然后的阳性筛选了，首先要进行有限稀释法，这次就来分享一下这个简单量大的方法，希望大家留下宝贵的意见！

百度文库链接：http://wenku.baidu.com/view/92d9d4195acfa1c7aa00ccfb.html
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ttxs99

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1楼2014-11-05 10:55:24
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pypsak

金虫 (正式写手)
引用回帖:
56楼: Originally posted by 夏至1990 at 2014-11-06 11:22:58
筛选时候，阳性细胞剩余非常少，对照阴性细胞死完，阳性细胞基本也死完了，不知道该怎么搞了，是确保阳性细胞还在的时候，不加抗生素，让它涨起来，然后是有限稀释。还是直接消化挑单克隆，这样细胞会不会死亡 ...

你是做药杀的时候阳性阴性全死完了？有没有试过转个GFP看看转染效率呢，或者摸好药杀条件。
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59楼2014-11-10 08:58:01
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