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[求助]
二次重组菌搞不定，求助
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做谷棒菌基因敲除。电转之后，涂布到km10平板长2天，一块板长四五个菌落，手提基因组PCR验证，一条原始片段条带（比较暗），一条突变之后的条带（比较亮），然后摇菌,100ul涂布10%蔗糖板，长的较多，但是都是单菌落，有大有小，还算容易挑，挑菌同时划在km10平板和LB平板，一块平板有两三个所需要的菌，把km10平板上不生长，LB平板生长的菌，手提基因组PCR验证，只有一条原始片段条带，都是回复突变。以上过程重复好几遍了。求大神帮忙  |
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