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ngd2013

新虫 (小有名气)

[求助] 二次重组菌搞不定,求助

做谷棒菌基因敲除。电转之后,涂布到km10平板长2天,一块板长四五个菌落,手提基因组PCR验证,一条原始片段条带(比较暗),一条突变之后的条带(比较亮),然后摇菌,100ul涂布10%蔗糖板,长的较多,但是都是单菌落,有大有小,还算容易挑,挑菌同时划在km10平板和LB平板,一块平板有两三个所需要的菌,把km10平板上不生长,LB平板生长的菌,手提基因组PCR验证,只有一条原始片段条带,都是回复突变。以上过程重复好几遍了。求大神帮忙
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