24小时热门版块排行榜    

查看: 807  |  回复: 5
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

种瓜得豆

[交流] 为什么二次PCR产物做模板只有地毯式拖尾了

第一次拿CDNA,P的,有目的条带较淡,拿该产物做模板相同条件还有条带,还不是很亮,可是拿二次产物再做模板相同条件就只有地毯式拖尾了
。拿第一次P的产物做模板仍有条带。
是否二次产物做模板体系要有所改动,可是一次产物跑出的目的条带并不很亮啊......
啊,拜托高手指点
25ul:引物各1ul,
模板0.5ul,
酶0.5ul,
buffer含镁离子2.5ul
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

随风而过

银虫 (小有名气)

这种情况是因为非特异性扩增,实在不行你可以设计两套引物,做“套式PCR”,还可以用高保真酶或许也能解决此问题。
5楼2008-05-09 08:58:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答

wjswj

木虫 (正式写手)

小木虫领金币专业户

★ ★
lixiaoyi1981(金币+2,VIP+0):有原因分析,又有解决办法,谢谢啊
我最近也在尝试二次PCR,但是没有试过3次PCR:)看了一些文章说是有可能前一次的PCR产物中含有不少非特异扩增,而非特异扩增在之后的PCR中也可以充当模板的角色,因此,多数二次PCR产物会有拖尾现象。可以通过稀释前次PCR产物的方法来减少非特异扩增产物对之后反应的影响。试试吧,不确定有效。
金币是赌出来的
2楼2008-05-08 13:52:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jennifertina

建议加大PCR体系.50ul;增大模板量;
3楼2008-05-08 15:33:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

juliahq

铜虫 (小有名气)

可以尝试分离第一次产物的目标带,再扩增这样非特异带的影响就小了
4楼2008-05-09 00:03:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 6/300 2026-11-05 18:11 by My20PsvIExYO
[考博] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 6/300 2026-11-05 18:00 by My20PsvIExYO
[公派出国] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 7/350 2026-11-05 17:58 by My20PsvIExYO
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 kvewwGtKktqB 2026-11-04 8/400 2026-11-05 17:47 by My20PsvIExYO
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +5 kvewwGtKktqB 2026-11-04 13/650 2026-11-05 17:47 by My20PsvIExYO
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +5 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 8/400 2026-11-05 17:38 by My20PsvIExYO
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 14/700 2026-11-05 17:36 by My20PsvIExYO
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +5 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 10/500 2026-11-05 17:36 by My20PsvIExYO
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 11/550 2026-11-05 17:36 by My20PsvIExYO
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 9/450 2026-11-05 17:26 by My20PsvIExYO
[考研] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 13/650 2026-11-05 17:15 by My20PsvIExYO
[基金申请] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 7/350 2026-11-05 16:08 by My20PsvIExYO
[公派出国] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 7/350 2026-11-05 16:08 by My20PsvIExYO
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 9/450 2026-11-05 15:46 by My20PsvIExYO
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 hNpp4Y2CGvSC 2026-11-04 10/500 2026-11-05 15:35 by My20PsvIExYO
[考研] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 10/500 2026-11-05 15:24 by My20PsvIExYO
[公派出国] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 9/450 2026-11-05 15:13 by My20PsvIExYO
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-05 11:10 by PYZmcHr5kSaq
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 10/500 2026-11-05 10:39 by PYZmcHr5kSaq
[基金申请] 各位基础老师们,看完中央《从严治党》的决定后,对学术界更加有信心了吧 +5 iaeyuan 2026-11-01 5/250 2026-11-04 14:43 by jinchengzi
信息提示
请填处理意见