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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 为什么二次PCR产物做模板只有地毯式拖尾了
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种瓜得豆

[交流] 为什么二次PCR产物做模板只有地毯式拖尾了

第一次拿CDNA，P的，有目的条带较淡，拿该产物做模板相同条件还有条带，还不是很亮，可是拿二次产物再做模板相同条件就只有地毯式拖尾了
。拿第一次P的产物做模板仍有条带。
是否二次产物做模板体系要有所改动，可是一次产物跑出的目的条带并不很亮啊......
啊，拜托高手指点
25ul：引物各1ul,
模板0.5ul,
酶0.5ul,
buffer含镁离子2.5ul
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1楼 2008-05-08 09:32:26
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wjswj

木虫 (正式写手)

小木虫领金币专业户
★ ★
lixiaoyi1981(金币+2,VIP+0):有原因分析，又有解决办法，谢谢啊
我最近也在尝试二次PCR，但是没有试过3次PCR：）看了一些文章说是有可能前一次的PCR产物中含有不少非特异扩增，而非特异扩增在之后的PCR中也可以充当模板的角色，因此，多数二次PCR产物会有拖尾现象。可以通过稀释前次PCR产物的方法来减少非特异扩增产物对之后反应的影响。试试吧，不确定有效。
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金币是赌出来的
2楼2008-05-08 13:52:41
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jennifertina

建议加大PCR体系.50ul;增大模板量;
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3楼2008-05-08 15:33:13
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juliahq

铜虫 (小有名气)
可以尝试分离第一次产物的目标带，再扩增这样非特异带的影响就小了
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4楼2008-05-09 00:03:29
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随风而过

银虫 (小有名气)
这种情况是因为非特异性扩增，实在不行你可以设计两套引物，做“套式PCR”，还可以用高保真酶或许也能解决此问题。
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5楼2008-05-09 08:58:33
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月月大可

木虫 (著名写手)
一般情况下最好不要用PCR产物再做模板，特别是用一些保真度较低的酶扩增出来的。
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6楼2008-05-10 13:51:07
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