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lvxiaobu0907

银虫 (小有名气)

[交流] 求助 已有6人参与

扩片段连载体时选择的两个酶切为点为Spe1和Xba1为什么长的斑很密，却没有阳性克隆，好像是同尾酶自连了吗？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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世事不难，吾辈何用
1楼 2014-11-02 06:37:57
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dongdekun

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★
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gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2014-11-02 22:01:03
没有其他好选的酶切位点了么？为什么要选择同尾酶呢？
载体自连，目的片段自连，载体——目的片段连接，效率（比例）肯定很低的。
实在没有其他酶切位点，就多挑些克隆试试看吧。
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2楼2014-11-02 13:03:51
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myheat

铜虫 (小有名气)
★ ★
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gyesang: 金币+1, 鼓励交流！ 2014-11-02 22:01:12
那还不如单酶切连接

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3楼2014-11-02 16:44:26
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yelon315

禁虫 (小有名气)
★ ★ ★
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gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2014-11-02 22:01:18
本帖内容被屏蔽
4楼2014-11-02 19:33:47
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cuihao102

木虫 (小有名气)
★ ★ ★
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gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2014-11-02 22:01:25
你可以做个去磷酸化反应，这样就能减少自连的概率了
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5楼2014-11-02 21:37:26
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lvxiaobu0907

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by yelon315 at 2014-11-02 19:33:47
如果你的载体选择不了其他的酶，那就建议单酶切，用infusion连，这个方法类似同源重组，知道是同尾酶那就不要用了呀！自连的效率比你连目的基因的效率大的多~~

我现在用infusion重组的方法，换了酶切位点已经成功了，谢谢了
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世事不难，吾辈何用
6楼2014-11-03 18:36:32
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lvxiaobu0907

银虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by cuihao102 at 2014-11-02 21:37:26
你可以做个去磷酸化反应，这样就能减少自连的概率了

嗯嗯
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世事不难，吾辈何用
7楼2014-11-03 18:36:46
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稻稻

铜虫 (著名写手)
★
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引用回帖:
2楼: Originally posted by dongdekun at 2014-11-02 13:03:51
没有其他好选的酶切位点了么？为什么要选择同尾酶呢？
载体自连，目的片段自连，载体——目的片段连接，效率（比例）肯定很低的。
实在没有其他酶切位点，就多挑些克隆试试看吧。

海绵宝宝，你该洗澡啦
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做一个不动声色的人，不准情绪化，不准回头看。
8楼2014-11-03 20:15:48
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cnzpli

金虫 (正式写手)
★
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用同源重组试剂盒进行连接 不需要考虑酶切位点 直接解决载体问题

[ 发自小木虫客户端 ]
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9楼2014-11-03 20:18:26
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