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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求平滑末端的连接条件
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clf0803

银虫 (正式写手)

[交流] 求平滑末端的连接条件

各位老师好！
听说NdeI的酶切效率接连接效率都不高，我看到takara公司关于NdeI的说明上说该酶切出的末端比一般2个碱基的突出末端连接效率低，所以要用平滑端的连接条件。请问一般平滑末端的连接条件是怎样的？谢谢！

[ Last edited by clf0803 on 2008-5-6 at 14:37 ]
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1楼 2008-05-06 11:06:39
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xutian32

金虫 (小有名气)
条件跟粘性末端一样，不过连接时间要长一些，挑菌的时候也要多挑一些
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2楼2008-05-06 11:10:05
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clf0803

银虫 (正式写手)
一般我都连接12-16h，可以吗？
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3楼2008-05-06 14:38:02
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bioartist

木虫 (正式写手)

无菌草莓
平末段连接在4度过夜的条件下比较好!
     你可以制作10ul体系，过夜后取5ul转化，剩下的5ul继续连接，若先用的5ul未连接上，再用剩下的5ul转化，这样试验成功的几率比较大！！
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4楼2008-05-06 18:06:23
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clf0803

银虫 (正式写手)
为什么平滑段的反应反而在4度比较好？反应时间不是越长越好吗？
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5楼2008-05-06 20:43:04
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clf0803

银虫 (正式写手)
你们在做NdeI酶切位点的时候遇到过这种情况吗？
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6楼2008-05-06 20:58:22
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