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clf0803

银虫 (正式写手)

[交流] 求平滑末端的连接条件

各位老师好!
听说NdeI的酶切效率接连接效率都不高,我看到takara公司关于NdeI的说明上说该酶切出的末端比一般2个碱基的突出末端连接效率低,所以要用平滑端的连接条件。请问一般平滑末端的连接条件是怎样的?谢谢!

[ Last edited by clf0803 on 2008-5-6 at 14:37 ]
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xutian32

金虫 (小有名气)

条件跟粘性末端一样,不过连接时间要长一些,挑菌的时候也要多挑一些
2楼2008-05-06 11:10:05
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clf0803

银虫 (正式写手)

一般我都连接12-16h,可以吗?
3楼2008-05-06 14:38:02
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bioartist

木虫 (正式写手)

无菌草莓

平末段连接在4度过夜的条件下比较好!
     你可以制作10ul体系,过夜后取5ul转化,剩下的5ul继续连接,若先用的5ul未连接上,再用剩下的5ul转化,这样试验成功的几率比较大!!
4楼2008-05-06 18:06:23
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clf0803

银虫 (正式写手)

为什么平滑段的反应反而在4度比较好?反应时间不是越长越好吗?
5楼2008-05-06 20:43:04
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clf0803

银虫 (正式写手)

你们在做NdeI酶切位点的时候遇到过这种情况吗?
6楼2008-05-06 20:58:22
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