| 查看: 1269 | 回复: 14 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
8mile木虫 (正式写手)
|
[交流]
询问PCR退火温度设计
|
||
|
引物单上数据如下 上游TTACAAGATGGAGCCTCACC（GC含量50%） Tm（1M Na+）：68.2 Tm（50mM Na+）：46.6 下游CAAAGAATAACCCAGGACGA（GC含量45%） Tm（1M Na+）：66.2 Tm（50mM Na+）：44.6 退火温度应设多少？马上毕业论文答辩了，实验还没做完，急~ 顺便问下大家，Tm（1M Na+）和Tm（50mM Na+）有什么区别啊？ [search]PCR退火温度[/search] [ Last edited by 8mile on 2008-5-6 at 10:24 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
299求调剂
已经有8人回复
-
一志愿北京理工大学本科211材料工程294求调剂
已经有6人回复
-
300求调剂，材料科学英一数二
已经有8人回复
-
招收生物学/细胞生物学调剂
已经有5人回复
-
070305高分子化学与物理 304分求调剂
已经有7人回复
-
289求调剂
已经有13人回复
-
一志愿哈尔滨工业大学材料与化工方向336分
已经有9人回复
-
081200-11408-276学硕求调剂
已经有6人回复
-
调剂求院校招收
已经有5人回复
-
调剂310
已经有8人回复
8mile
木虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 2144.4
- 红花: 1
- 帖子: 307
- 在线: 202.1小时
- 虫号: 533038
- 注册: 2008-03-25
- 专业: 化学生物学与生物有机化学
5楼2008-05-06 10:24:51
bioartist
木虫 (正式写手)
无菌草莓
- BioEPI: 1
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 2012.9
- 红花: 4
- 帖子: 611
- 在线: 105.2小时
- 虫号: 419482
- 注册: 2007-07-06
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
★ ★
lixiaoyi1981(金币+2,VIP+0):比较详细，值得鼓励。
lixiaoyi1981(金币+2,VIP+0):比较详细，值得鼓励。
|
退火温度是影响PCR特异性的较重要因素。变性后温度快速冷却至40℃～60℃，可使引物和模板发生结合。由于模板DNA 比引物复杂得多，引物和模板之间的碰撞结合机会远远高于模板互补链之间的碰撞。退火温度与时间，取决于引物的长度、碱基组成及其浓度，还有靶基序列的长度。对于20个核苷酸，G+C含量约50%的引物，55℃为选择最适退火温度的起点较为理想。引物的复性温度可通过以下公式帮助选择合适的温度(C. W. 迪芬巴赫 et al., 1995)： Tm值(解链温度)=4(G+C)＋2(A+T) 复性温度=Tm值-(5～10℃) 在Tm值允许范围内，选择较高的复性温度可大大减少引物和模板间的非特异性结合， 提高PCR反应的特异性。复性时间一般为30～60sec，足以使引物与模板之间完全结合。 |
3楼2008-05-06 09:39:48
辛雨237
铁杆木虫 (著名写手)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 8772.7
- 散金: 2824
- 红花: 31
- 沙发: 2
- 帖子: 2205
- 在线: 766.9小时
- 虫号: 533462
- 注册: 2008-03-26
- 性别: MM
- 专业: 污染生态学
4楼2008-05-06 09:57:49
8mile
木虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 2144.4
- 红花: 1
- 帖子: 307
- 在线: 202.1小时
- 虫号: 533038
- 注册: 2008-03-25
- 专业: 化学生物学与生物有机化学
6楼2008-05-06 10:25:31
