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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » T-RFLP中回收及酶切相关问题
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张永婧1991

新虫 (初入文坛)
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9楼: Originally posted by j2 at 2014-10-28 21:28:22
不用loading buffer能跑出东西来？

能的，65度再失活30min就可以了，试剂公司说是可以的！
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11楼2014-11-06 10:38:38
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张永婧1991

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by peterrjp at 2014-10-26 21:17:20
生工、天根的PCR切胶回收或过柱纯化试剂盒都没关系的。当年我专门负责T-RFLP分析仪...

你好，我还想请问一下~我把样品送到生工检测，数据已经回来了，我做的是猪肠道微生物多样性，我看大多数用这个方法的是土壤的。。。你做数据分析一般是在网站上对比数据吗？这个可靠吗？还有就是一般用哪些网站比较靠谱，我最近学习T-REX这个，可是总是出问题，请教大神呐！
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12楼2014-11-06 10:45:23
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硝化细菌

新虫 (初入文坛)
T-RFLP酶切体系大家都是做多大体系的？
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13楼2015-02-10 09:48:50
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xiting0208

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 张永婧1991 at 2014-11-06 10:35:07
恩，我已经做好了，直接把PCR产物过柱纯化，然后再酶切的~...

酶切是直接琼脂糖电泳就可以看到酶切条带吗？为什么我切了快一个月却什么都没有切出来
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努力却总失败的大烧杯
14楼2015-05-01 12:47:54
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xiting0208

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 张永婧1991 at 2014-11-06 10:35:07
恩，我已经做好了，直接把PCR产物过柱纯化，然后再酶切的~...

PCR产物过柱纯化了，酶切怎么都切不出来，不知道问题出在了哪里，楼主求救命
酶切体系：PCR产物 15ul MspI 1ul，Rsal 1ul，Buffer 2ul，水 6ul
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努力却总失败的大烧杯
15楼2015-05-05 16:58:55
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xiting0208

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 张永婧1991 at 2014-11-06 10:35:07
恩，我已经做好了，直接把PCR产物过柱纯化，然后再酶切的~...

跪求楼主赐教，为什么我酶切切不出来，体系是：PCR产物（已过柱纯化） 15ul   MspI 1ul  Rsal 1ul Buffer 2ul 水 6ul
已经做了快两个月了，就是切不出来
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努力却总失败的大烧杯
16楼2015-05-06 08:31:50
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13310111

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

也有可能是切完之后不同大小片段浓度太低，所以跑胶会看不出条带。
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17楼2015-10-30 13:53:06
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amy133253

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 张永婧1991 at 2014-11-06 10:35:07
恩，我已经做好了，直接把PCR产物过柱纯化，然后再酶切的~...

你好，麻烦问下，为什么我的16s引物27F上进行了FAM标记，然后用27F和1492R扩增，就是扩不出来条带是怎么回事
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赶紧毕业吧
18楼2016-12-20 18:21:37
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