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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 质粒构建问题
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zrj123456

新虫 (小有名气)

[交流] 质粒构建问题 已有8人参与

单酶切质粒后，出现两个片段，不做胶回收，清洁后直接与另一个酶切后载体连接，会出现什么现象？胶回收率实在是低啊？想这样竞争结合，会出现我要的结果吗
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1楼 2014-10-23 17:05:55
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zrj123456

新虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by yudaoqian88 at 2014-10-26 16:09:31
理论上是可以这样做的，两个载体酶切后混合连接，能产生若干载体组合，其中含有目标载体。但有时由于片段大小或序列组成差异，效率比较低，而且你的是单酶切连接，自连的比率更大！需要考虑多种非目标重组子的筛选策 ...

我是这样想的，去取多重自连，用载体上的抗性筛选，应该只有三种：载体自连、载体与目标片段链接，载体与不要的载体链接，用菌落PCR应该可以筛选出来吧？我这样考虑的对不对啊？谢谢大侠
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16楼2014-10-27 08:34:32
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zergbloody

铁虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-10-24 20:41:00
效率低不怕 其实很少量的载体也可以连接的 多了反而会抑制连接反应 关键是你连接酶要够好

[ 发自小木虫客户端 ]
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2楼2014-10-23 22:50:20
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jiaowenqiang

铜虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
为什么会单酶切？那样的话怎么连接载体？
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3楼2014-10-24 08:16:06
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jiaowenqiang

铜虫 (正式写手)
为什么单酶切，怎么连接载体呢
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4楼2014-10-24 08:16:38
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