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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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zrj123456

新虫 (小有名气)

[交流] 质粒构建问题 已有8人参与

单酶切质粒后,出现两个片段,不做胶回收,清洁后直接与另一个酶切后载体连接,会出现什么现象?胶回收率实在是低啊?想这样竞争结合,会出现我要的结果吗
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zrj123456

新虫 (小有名气)

引用回帖:
13楼: Originally posted by yudaoqian88 at 2014-10-26 16:09:31
理论上是可以这样做的,两个载体酶切后混合连接,能产生若干载体组合,其中含有目标载体。但有时由于片段大小或序列组成差异,效率比较低,而且你的是单酶切连接,自连的比率更大!需要考虑多种非目标重组子的筛选策 ...

我是这样想的,去取多重自连,用载体上的抗性筛选,应该只有三种:载体自连、载体与目标片段链接,载体与不要的载体链接,用菌落PCR应该可以筛选出来吧?我这样考虑的对不对啊?谢谢大侠
16楼2014-10-27 08:34:32
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zergbloody

铁虫 (正式写手)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-10-24 20:41:00
效率低不怕 其实很少量的载体也可以连接的 多了反而会抑制连接反应 关键是你连接酶要够好

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2014-10-23 22:50:20
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jiaowenqiang

铜虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
为什么会单酶切?那样的话怎么连接载体?
3楼2014-10-24 08:16:06
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jiaowenqiang

铜虫 (正式写手)

为什么单酶切,怎么连接载体呢
4楼2014-10-24 08:16:38
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