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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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zrj123456

新虫 (小有名气)

[交流] 质粒构建问题 已有8人参与

单酶切质粒后,出现两个片段,不做胶回收,清洁后直接与另一个酶切后载体连接,会出现什么现象?胶回收率实在是低啊?想这样竞争结合,会出现我要的结果吗
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zrj123456

新虫 (小有名气)

引用回帖:
12楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2014-10-26 15:45:15
这样很不好做。
1.你一个用单酶切,切下的两端酶切位点一样,这样的片段不太好连上。
2.载体也是相同的酶,会自连。
本来都回收纯化后的就自连很多,再这样就更不好做了。
而且载体需要去磷酸化。

为什么不太好连上?不是有粘性末端吗?现在我已经做了三批了,每次连假阳性的都没有长出来,转化后的板子特别干净!!!所以才想着这样做,会不会是浓度太低的原因了,我的载体每次都去磷酸化
15楼2014-10-27 08:30:38
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zergbloody

铁虫 (正式写手)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-10-24 20:41:00
效率低不怕 其实很少量的载体也可以连接的 多了反而会抑制连接反应 关键是你连接酶要够好

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2014-10-23 22:50:20
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jiaowenqiang

铜虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
为什么会单酶切?那样的话怎么连接载体?
3楼2014-10-24 08:16:06
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jiaowenqiang

铜虫 (正式写手)

为什么单酶切,怎么连接载体呢
4楼2014-10-24 08:16:38
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