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humants金虫 (正式写手)
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[交流]
【求助】菌落PCR扩增目的基因
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我要PCR扩增目的基因，可是含目的基因的质粒老是提不出来，我打算用菌落PCR来扩增目的基因，不知道可不可以？？？可信度高么？. 如果可以因该注意些什么问题？能否详细点本人是新手，谢谢 注： 我的宿主菌是DH5a；目的基因大小是1.0Kb |
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8楼2008-05-05 23:40:51
2楼2008-05-04 21:42:01
humants
金虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 603.8
- 散金: 1
- 帖子: 609
- 在线: 6.9小时
- 虫号: 532996
- 注册: 2008-03-25
- 性别: GG
- 专业: 蛋白质组学
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求助】质粒提不出来 我最近打算做PC扩增目的基因，引物都来了，却发现目的基因提不出来了，老板还催着，着急啊。 我的目的基因所用的载体是invitrogen的pcDNA3.1/ZEO(+)，其上面用的Ori是PUC origin ,我看文献上说这种复制子拷贝数能到100多，但是除了第一次转化完了，用保存完菌种剩下的提出来了一次，以后提了三次除了RNA什么都没有。 我问老师他说可能是抗生素失效了，于是我就用无抗性的DH5Α做了一次抗生素对照,结果什么都没长，抗生素没问题，我实在想不出别的原因了，还不好意思去问老师，还请各位虫友给以指点，不胜感激。 载体图谱： （附件中也有） http://tools.invitrogen.com/cont ... pcdna3.1zeo_map.pdf |
3楼2008-05-04 22:20:59
yufangbo
铁杆木虫 (著名写手)
- 应助: 19 (小学生)
- 贵宾: 0.004
- 金币: 7741.7
- 散金: 1314
- 红花: 28
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- 在线: 206.7小时
- 虫号: 388352
- 注册: 2007-05-31
- 性别: GG
- 专业: 环境微生物学
4楼2008-05-05 09:06:29
10