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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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humants

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助】菌落PCR扩增目的基因

我要PCR扩增目的基因,可是含目的基因的质粒老是提不出来,我打算用菌落PCR来扩增目的基因,不知道可不可以???可信度高么?.
如果可以因该注意些什么问题?能否详细点本人是新手,谢谢

注:
我的宿主菌是DH5a;目的基因大小是1.0Kb
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phyllislhy

木虫 (正式写手)

你的目的基因在大肠杆菌中是否有同源基因?
7楼2008-05-05 22:35:27
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张力民

铜虫 (小有名气)

质粒怎么会提不出来呢?
2楼2008-05-04 21:42:01
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humants

金虫 (正式写手)

求助】质粒提不出来

我最近打算做PC扩增目的基因,引物都来了,却发现目的基因提不出来了,老板还催着,着急啊。

我的目的基因所用的载体是invitrogen的pcDNA3.1/ZEO(+),其上面用的Ori是PUC origin ,我看文献上说这种复制子拷贝数能到100多,但是除了第一次转化完了,用保存完菌种剩下的提出来了一次,以后提了三次除了RNA什么都没有。

我问老师他说可能是抗生素失效了,于是我就用无抗性的DH5Α做了一次抗生素对照,结果什么都没长,抗生素没问题,我实在想不出别的原因了,还不好意思去问老师,还请各位虫友给以指点,不胜感激。

载体图谱:
(附件中也有)
http://tools.invitrogen.com/cont ... pcdna3.1zeo_map.pdf
3楼2008-05-04 22:20:59
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yufangbo

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★ ★ ★
lixiaoyi1981(金币+2,VIP+0):欢迎常来,赠人玫瑰,手有余香。谢谢
humants(金币+2,VIP+0):谢谢...我试一下
菌体PCR是可以的,只要在反应体系中加入一定量的吐温20(10%,25微升体系加2微升),另外只要用白枪头在菌落上蘸一下即可转入PCR管中,菌落量不可过多,另外菌体最好是刚培养出来的,不要过老,祝你好运
4楼2008-05-05 09:06:29
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