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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 大片段载体连接用量
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dingxiangzi

新虫 (初入文坛)

[交流] 大片段载体连接用量

做连接反应时，除了调节载体片段比例外，还要考虑他们绝对数量的问题。一般载体片段越大，需要的量要大一些。想知道载体片段大小和连接时需用量的对应关系。大家连植物表达载体时一般载体加进去多少，我指的是绝对质量。宝生物论坛上说25ul体系里一般载体要0.03pmol, 换算过来我12K的片段就要加二百多纳克才够用，但我收胶浓度常常是个位数。真的需要加这么多去连吗？
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1楼 2008-05-04 17:24:49
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bioartist

木虫 (正式写手)

无菌草莓
很常规的试验操作，注意下就可以了！
      载体一般都是高拷贝的，试剂盒纯化的效果都很好，产量也比较高，建议楼主直接用质粒纯化试剂盒纯化质粒，然后酶切处理载体，再割胶回收，效果应该不错！
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3楼2008-05-06 09:23:11
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xiukuncui

木虫 (正式写手)
是按照一定的比例进行的，载体量/载体大小：片段量/片段大小=1：3-----1：10之间，你自己计算一下就行，
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2楼2008-05-04 18:40:43
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