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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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dingxiangzi

新虫 (初入文坛)

[交流] 大片段载体连接用量

做连接反应时,除了调节载体片段比例外,还要考虑他们绝对数量的问题。一般载体片段越大,需要的量要大一些。想知道载体片段大小和连接时需用量的对应关系。大家连植物表达载体时一般载体加进去多少,我指的是绝对质量。宝生物论坛上说25ul体系里一般载体要0.03pmol, 换算过来我12K的片段就要加二百多纳克才够用,但我收胶浓度常常是个位数。真的需要加这么多去连吗?
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xiukuncui

木虫 (正式写手)

是按照一定的比例进行的,载体量/载体大小:片段量/片段大小=1:3-----1:10之间,你自己计算一下就行,
2楼2008-05-04 18:40:43
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bioartist

木虫 (正式写手)

无菌草莓

很常规的试验操作,注意下就可以了!
      载体一般都是高拷贝的,试剂盒纯化的效果都很好,产量也比较高,建议楼主直接用质粒纯化试剂盒纯化质粒,然后酶切处理载体,再割胶回收,效果应该不错!
3楼2008-05-06 09:23:11
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