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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » Gateway构建载体BP反应涂平板长不出单菌落
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huangsz997

铜虫 (小有名气)
您好，我也在gateway这卡住了，我LR涂平板后也长较多的单克隆，可是一检测（载体上引物）就没条带，假阳性有那么高吗？我送公司测序，因为有发卡结构 测序结果也不理想…… 想问一下你的LR反应体系是什么样的 谢谢
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11楼2014-11-18 14:17:50
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天地一微尘

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

将目的片段浓度是多少？如果太小需要加大，一般来说PCR产物和入门载体之间的比例是1：1，另外就是反应时25度下>=5h，注意要保证温度的稳定，最好就放在PCR槽里孵育。
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12楼2015-04-30 08:30:16
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zengtian2680

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

确定PCR产物没问题？接头也都对了？
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13楼2015-05-27 04:13:40
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新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 大笨熊敏 at 2014-10-22 20:47:06
你看过Gateway构建载体的那篇说明书了没有的。它上面介绍说目的产物和载体大约都在150ng左右，我做BP反应一般只反应10h，时间太长好像也会有影响。

请问12h可以吗？ 我是反应12h，可是一直都不长单菌落。

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14楼2017-08-24 20:44:46
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新虫 (小有名气)
楼主，最后你的单菌落长出来了吗？

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15楼2017-08-24 20:45:57
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