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haby1118

金虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
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虫号: 2862635

[交流] PCR,WB

大家好，最近有一个问题一直干扰着我，求助大家的帮忙与解答，就是我鉴定一种蛋白在动物组织上的表达，我前期从基因方面做了PCR,跑胶，测序，结果都成功了，也挺理想，但是最近做WB，就是做不出来，不知道是什么原因，怎么回事啊，这种蛋白到底存在吗？谁可以帮我深入分析分析

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1楼 2014-10-18 17:57:59

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s_lich28

铜虫 (初入文坛)

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虫号: 1565667

★
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楼主可以先查一下文献看有没有目标蛋白在其他组织表达的报道，如果有的话是不是做了WB，用的抗体是什么。建议楼主使用和文献相同的抗体。然后楼主可以用目标组织抽提液探讨一下抗体的使用条件，主要是上样量和抗体稀释倍数。一开始可以以看到目标条带（根据目标蛋白的分子量）为目的，别担心背景过高，等确定条带了以后可以减少上样量或者增加抗体稀释倍数来降低背景。希望对楼主有帮助。