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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » PCR,WB
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haby1118

金虫 (小有名气)

[交流] PCR,WB

大家好，最近有一个问题一直干扰着我，求助大家的帮忙与解答，就是我鉴定一种蛋白在动物组织上的表达，我前期从基因方面做了PCR,跑胶，测序，结果都成功了，也挺理想，但是最近做WB，就是做不出来，不知道是什么原因，怎么回事啊，这种蛋白到底存在吗？谁可以帮我深入分析分析  
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1楼 2014-10-18 17:57:59
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s_lich28

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
楼主可以先查一下文献看有没有目标蛋白在其他组织表达的报道，如果有的话是不是做了WB，用的抗体是什么。建议楼主使用和文献相同的抗体。然后楼主可以用目标组织抽提液探讨一下抗体的使用条件，主要是上样量和抗体稀释倍数。一开始可以以看到目标条带（根据目标蛋白的分子量）为目的，别担心背景过高，等确定条带了以后可以减少上样量或者增加抗体稀释倍数来降低背景。希望对楼主有帮助。
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haby1118
22楼2014-10-18 23:22:31
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tangjiguoice

木虫 (著名写手)
★
haby1118(金币+1): 谢谢参与
顶贴！
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7楼2014-10-18 18:56:36
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九头狼狗2楼
2014-10-18 18:21   回复  
haby1118(金币+1): 谢谢参与
。。 [ 发自小木虫客户端 ]
dmbb3楼
2014-10-18 18:28   回复  
haby1118(金币+1): 谢谢参与
假大空4楼
2014-10-18 18:30   回复  
haby1118(金币+1): 谢谢参与
tzynew5楼
2014-10-18 18:30   回复  
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jeangong6楼
2014-10-18 18:50   回复  
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怕哦哦哦8楼
2014-10-18 18:59   回复  
haby1118(金币+1): 谢谢参与
readytogo9楼
2014-10-18 19:00   回复  
haby1118(金币+1): 谢谢参与
ylheping10楼
2014-10-18 19:03   回复  
haby1118(金币+1): 谢谢参与
SCI-ICS11楼
2014-10-18 19:15   回复  
haby1118(金币+1): 谢谢参与
祝福
qinzonghui12楼
2014-10-18 19:21   回复  
haby1118(金币+1): 谢谢参与
血性红魔13楼
2014-10-18 19:27   回复  
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91088397414楼
2014-10-18 19:35   回复  
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qqaoqq15楼
2014-10-18 20:01   回复  
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kiss2008553716楼
2014-10-18 20:05   回复  
haby1118(金币+1): 谢谢参与
无为之人17楼
2014-10-18 20:08   回复  
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qqllqq18楼
2014-10-18 20:30   回复  
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xiejf19楼
2014-10-18 20:49   回复  
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1
cxjzly200820楼
2014-10-18 20:57   回复  
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gorgan21楼
2014-10-18 21:26   回复  
haby1118(金币+1): 谢谢参与
haby111823楼
2015-04-10 11:15   回复  
送红花一朵
引用回帖:
22楼: Originally posted by s_lich28 at 2014-10-18 23:22:31 楼主可以先查一下文献看有没有目标蛋白在其他组织表达的报道，如果有的话是不是做了WB，用的抗体是什么。建议楼主使用和文献相同的抗体。然后楼主可以用目标组织抽提液探讨一下抗体的使用条件，主要是上样量和抗体稀 ...

唉
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