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无涯学子

金虫 (正式写手)

麦粒


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
4楼: Originally posted by needle_ld at 2014-10-18 14:14:06
我不知道你用什么反转录体系。我看不到你的说明书。
我的理解是,反转录并不扩增。所以,通常我都是准备2000ng的RNA做反转录。RT之后,cDNA就当是2000ng。20ul的体系,1ul就是100ng。
楼上朋友们说反转录之后测cD ...

这个怎么稀释呢?直接在反转录液体里加入灭菌蒸馏水吗?
人生能有几回搏
11楼2014-10-24 17:36:31
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ykluuniu

金虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
1.首先,可以按照楼上说的:1ug/20ul=100ng/ul,但是,逆转录体系中的一些成分对QPCR反应是有抑制作用的,所以一般会把RT产物稀释后作为QPCR的模板;
2.QPCR是,cDNA用量不要超过QPCR反应体系的10%,
3.我的做法是:把cDNA稀释成10ng/ul(按照你RT时所加的RNA ug数来算就好了),然后QPCR体系中加2ul,这样做加样的精度能得到保证,20ng的模板一般来讲应该没问题的。
12楼2014-10-24 21:44:05
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曾经二过的我

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
4楼: Originally posted by needle_ld at 2014-10-18 14:14:06
我不知道你用什么反转录体系。我看不到你的说明书。
我的理解是,反转录并不扩增。所以,通常我都是准备2000ng的RNA做反转录。RT之后,cDNA就当是2000ng。20ul的体系,1ul就是100ng。
楼上朋友们说反转录之后测cD ...

可是反转录PCR后不是会扩增吗,2000ng的RNA做反转录。RT之后,cDNA就当是2000ng。20ul的体系,1ul就是100ng,这句实在不懂
13楼2018-03-16 10:33:53
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