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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » qrt-pcr加cDNA的量，怎么加？
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无涯学子

金虫 (正式写手)

麦粒
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引用回帖:
4楼: Originally posted by needle_ld at 2014-10-18 14:14:06
我不知道你用什么反转录体系。我看不到你的说明书。
我的理解是，反转录并不扩增。所以，通常我都是准备2000ng的RNA做反转录。RT之后，cDNA就当是2000ng。20ul的体系，1ul就是100ng。
楼上朋友们说反转录之后测cD ...

这个怎么稀释呢？直接在反转录液体里加入灭菌蒸馏水吗？
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人生能有几回搏
11楼2014-10-24 17:36:31
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ykluuniu

金虫 (小有名气)
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1.首先，可以按照楼上说的：1ug/20ul=100ng/ul，但是，逆转录体系中的一些成分对QPCR反应是有抑制作用的，所以一般会把RT产物稀释后作为QPCR的模板；
2.QPCR是，cDNA用量不要超过QPCR反应体系的10%，
3.我的做法是：把cDNA稀释成10ng/ul（按照你RT时所加的RNA ug数来算就好了），然后QPCR体系中加2ul，这样做加样的精度能得到保证，20ng的模板一般来讲应该没问题的。
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12楼2014-10-24 21:44:05
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曾经二过的我

新虫 (小有名气)
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
4楼: Originally posted by needle_ld at 2014-10-18 14:14:06
我不知道你用什么反转录体系。我看不到你的说明书。
我的理解是，反转录并不扩增。所以，通常我都是准备2000ng的RNA做反转录。RT之后，cDNA就当是2000ng。20ul的体系，1ul就是100ng。
楼上朋友们说反转录之后测cD ...

可是反转录PCR后不是会扩增吗，2000ng的RNA做反转录。RT之后，cDNA就当是2000ng。20ul的体系，1ul就是100ng，这句实在不懂
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13楼2018-03-16 10:33:53
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