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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » ～～～毕赤酵母优化及发酵相关探讨！！！
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lybio

金虫 (正式写手)

[交流] ～～～毕赤酵母优化及发酵相关探讨！！！

呵呵各位大侠踊跃发表你们的意见，偶有以下几个问题，希望大家能指教一二，thanks～～
偶现在用pPIC9K转GS115表达了一个目的蛋白，现在有对它的培养基进行优化然后上罐发酵，目前有好几个问题想各位能帮我解决一下，谢谢哈～～
1，毕赤有好几种表达培养基BMGY/BMMY,BSM和 FM22三种，我想问下，哪种更适合于发酵，有什么特别要注意的么？
2，偶在用BMGY/BMMY进行摇瓶优化时，因为在转接于BMMY中需要离心去菌体，这样很容易染菌，我想问的是有什么方法可简化这个步骤，或者不离心直接进行诱导可以么？
3，一般进行诱导表达时，酶活力最高是在72～96小时的时候对吧，，它进行菌种生长及转接诱导表达的时候，初始诱导OD是多少丫？OD是如何确定下来的？
4，其实还有一些问题，边讨论的时候再边提出来吧
最后在次谢谢各位大侠的帮忙了，呵呵
刚才发错版面了呜呜，不是故意的～
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1楼 2008-04-29 20:11:59
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wict

金虫 (正式写手)
推荐一个酵母菌专门论坛，感觉很不错，可以去咨询一下
http://bbs.bio668.com/thread.php?fid-48.html
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没有事的时候，我会望向白驼山，我清楚记得曾经有一个女人在那边等着我。其实"醉生梦死"只不过是她跟我开的一个玩笑，你越想知道自己是不是忘
5楼2008-04-30 16:39:55
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xiongxianghua

新虫 (初入文坛)
1 我们一直都用GMGY/BMMY,没试过别的.
2 摇瓶中直接诱导就可以了。
3 初始OD一般在20-40.摇瓶里根据GS115生长曲线,是个长期经验值.罐上根据溶氧水平突然持续上升时期。总体来说是取原始甘油将耗尽的时间点。
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2楼2008-04-30 10:27:53
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geraintmoore

新虫 (初入文坛)
1、BMGY,BMMY相对成本高，尤其是失败后……
2、见过有人把发酵罐子取下来离心的吗？没见过那么大的离心机吧？离心桶灭菌？恐怕要在无菌室里面搞发酵了……
3、绝对和你的蛋白性质有关系，只能摸索了……

新手一个，做了半年酵母了，说错的请批评指正，谢谢了！
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An Apple a Day, Keep Windows Away!
3楼2008-04-30 10:48:08
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yqhc

金虫 (小有名气)
1）多种培养基各试用一下就知道差别了，研究嘛就不要计较成本，BMMY重悬诱导较多见，
2）重悬离心诱导，离心管灭菌在超净台操作，一般不易染菌（说不怕较确切些），
3）诱导起始OD跟目的蛋白有关系，自己优化一下就好了，一般10-20，
哈哈，我也是做酵母的，希望共同交流讨论！
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4楼2008-04-30 13:10:35
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