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lybio

金虫 (正式写手)

[交流] ~~~毕赤酵母优化及发酵相关探讨!!!

呵呵各位大侠踊跃发表你们的意见,偶有以下几个问题,希望大家能指教一二,thanks~~
偶现在用pPIC9K转GS115表达了一个目的蛋白,现在有对它的培养基进行优化然后上罐发酵,目前有好几个问题想各位能帮我解决一下,谢谢哈~~
1,毕赤有好几种表达培养基BMGY/BMMY,BSM和 FM22三种,我想问下,哪种更适合于发酵,有什么特别要注意的么?
2,偶在用BMGY/BMMY进行摇瓶优化时,因为在转接于BMMY中需要离心去菌体,这样很容易染菌,我想问的是有什么方法可简化这个步骤,或者不离心直接进行诱导可以么?
3,一般进行诱导表达时,酶活力最高是在72~96小时的时候对吧,,它进行菌种生长及转接诱导表达的时候,初始诱导OD是多少丫?OD是如何确定下来的?
4,其实还有一些问题,边讨论的时候再边提出来吧
最后在次谢谢各位大侠的帮忙了,呵呵
刚才发错版面了呜呜,不是故意的~
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xiongxianghua

新虫 (初入文坛)

1 我们一直都用GMGY/BMMY,没试过别的.
2 摇瓶中直接诱导就可以了。
3 初始OD一般在20-40.摇瓶里根据GS115生长曲线,是个长期经验值.罐上根据溶氧水平突然持续上升时期。总体来说是取原始甘油将耗尽的时间点。
2楼2008-04-30 10:27:53
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geraintmoore

新虫 (初入文坛)

1、BMGY,BMMY相对成本高,尤其是失败后……
2、见过有人把发酵罐子取下来离心的吗?没见过那么大的离心机吧?离心桶灭菌?恐怕要在无菌室里面搞发酵了……
3、绝对和你的蛋白性质有关系,只能摸索了……

新手一个,做了半年酵母了,说错的请批评指正,谢谢了!
An Apple a Day, Keep Windows Away!
3楼2008-04-30 10:48:08
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yqhc

金虫 (小有名气)

1)多种培养基各试用一下就知道差别了,研究嘛就不要计较成本,BMMY重悬诱导较多见,
2)重悬离心诱导,离心管灭菌在超净台操作,一般不易染菌(说不怕较确切些),
3)诱导起始OD跟目的蛋白有关系,自己优化一下就好了,一般10-20,
哈哈,我也是做酵母的,希望共同交流讨论!
4楼2008-04-30 13:10:35
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wict

金虫 (正式写手)

推荐一个酵母菌专门论坛,感觉很不错,可以去咨询一下
http://bbs.bio668.com/thread.php?fid-48.html
没有事的时候,我会望向白驼山,我清楚记得曾经有一个女人在那边等着我。其实"醉生梦死"只不过是她跟我开的一个玩笑,你越想知道自己是不是忘
5楼2008-04-30 16:39:55
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