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sweetqm

木虫 (初入文坛)

[求助] miRNA提取 已有2人参与

血液中 miRNA 的提取  ，血液的要求是抗凝血还是非抗凝血呢？有什么区别呢？
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1楼 2014-10-11 20:46:39
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sweetqm

木虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by hyuqing at 2014-10-17 13:36:31
血清里的RNA应该是含量极低的，因为核酸一般都在细胞里，所以提取RNA不一定必须用血清吧，用非抗凝血，也可以用血沉沉淀吧？

由于课题的需要，所以只能用血清或是血浆。您是做miRNA的吗？知道做测定一个miRNA的PCR大概用多少血浆够吗？
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4楼2014-10-17 20:31:07
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Merrylegs

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
sweetqm(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-10-13 08:44:23
有一篇文献做过对比，血浆和血清提取的效果差异不大，都可以。
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2楼2014-10-12 20:22:36
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hyuqing

捐助贵宾 (小有名气)

Enriching beads

【答案】应助回帖

★
sweetqm(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-10-20 08:43:36
血清里的RNA应该是含量极低的，因为核酸一般都在细胞里，所以提取RNA不一定必须用血清吧，用非抗凝血，也可以用血沉沉淀吧？
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3楼2014-10-17 13:36:31
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hyuqing

捐助贵宾 (小有名气)

Enriching beads
★ ★
sweetqm(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-10-20 08:43:50
引用回帖:
4楼: Originally posted by sweetqm at 2014-10-17 20:31:07
由于课题的需要，所以只能用血清或是血浆。您是做miRNA的吗？知道做测定一个miRNA的PCR大概用多少血浆够吗？...

每个反应体系为5μl，包括1μl稀释后的cD- NA、0．25μl20×miRNA检测探针、2．5μl2×基因表 达MasterMix、1．25μl双蒸水。每个miRNA检测配置3平行所需的体系，轻柔混匀，使用ABIPrism 7900荧光定量PCR仪，PCR的反应条件：95℃5min→95℃15s，60℃1min进行45个循环。检测的miRNA和cel-miR-39在同一块384孔板上进行定量检测。原始数据用SDS软件进行初步分析。
不好意思呢，我只是研究蛋白质、RNA、DNA还有一些要分子富集的~~~具体用多少我也不太清楚，上面的那段话可以参考参考，是在文献中看到的哦，文献名是：《血清／血浆microRNA检测方法探讨与建立》
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5楼2014-10-19 18:28:35
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