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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助质粒提取
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jinling158

铜虫 (小有名气)

[交流] 求助质粒提取

我用试剂盒提的质粒，不知为什么加入solution3室温放置2分钟再室温离心之后，沉淀位于离心管的中间位置，而不是在底部。这是怎么回事呀？是不是我取的菌量太多的缘故？
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1楼 2008-04-29 16:29:02
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mark32280667806

是否在加入后马上混合了的，不能全部加完了再混合，还有最好还是在冰上多放几分钟。
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2楼2008-04-29 18:32:53
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tody4617

木虫 (小有名气)

一根筋家族之独根草
哥们，这很正常，只要你吸上清就没问题，而且稍微吸一些白色的物质都没问题，因为你下一步还要用氯仿抽提嘛，如果要问是什么原因，我觉得一个是你菌加得太多，或者说你的菌太浓，另一个离心不够。
另外，我建议你别用试剂盒，有时根本抽不出来（不骗你），我们实验室除了必要的酶，引物等是买的外，全部都是自己配的，而且抽提下过很好。
至于冰不病浴，我也觉得不是大问题，我抽过这么多质粒，从来没冰浴过，而且我也没用什么25：24：1的溶液，只用氯仿足够了，不是书上写什么我们就要一定做什么，达到目的为最终目标。
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票子-房子-车子-婆子-儿子
3楼2008-04-29 19:31:50
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superwheat

银虫 (正式写手)
我们一般用博大泰克和天根的kit，一般都能抽得出来的
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4楼2008-04-29 20:23:20
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shenqicc

金虫 (小有名气)
你说的加完了solution3之后，离心沉淀在离心管中间位置应该是附在壁上了吧？其实这个没关系的，你只要吸清液就行了，我们也经常会碰到这种情况！是里面的蛋白质太多了吧！~~
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5楼2008-04-29 22:39:37
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jinling158

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by shenqicc at 2008-4-29 22:39:
你说的加完了solution3之后，离心沉淀在离心管中间位置应该是附在壁上了吧？其实这个没关系的，你只要吸清液就行了，我们也经常会碰到这种情况！是里面的蛋白质太多了吧！~~

是的，但是除了壁上有，中间也能看见絮状物质。这样我就只能吸取少许的上清液了，不知道你们经常能吸取多少上清液？
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6楼2008-04-29 23:18:50
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jinling158

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by mark32280667806 at 2008-4-29 18:32:
是否在加入后马上混合了的，不能全部加完了再混合，还有最好还是在冰上多放几分钟。

能不能说清楚一点，难道不是加完了solution3之后再混合的吗？
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7楼2008-04-29 23:21:00
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greenspringmi

银虫 (正式写手)
质粒的试剂盒提取只要严格按照说明书来做就可以了，
加入溶液三后要温和混匀，静置冰上五分钟后离心，
呵呵，按照你买的试剂盒的说明说来做就是对的了，没有问题的，
而且说明书一般都有问题的解释，可以好好看看的
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8楼2008-04-30 08:07:44
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shenqicc

金虫 (小有名气)
是的，我有的时候也会出现中间有絮状物质，上清液自然吸得就少一点，这样的时候你可以把离心管再放离心机里面离一会，让沉淀尽量沉下去，吸的时候没必要尽量都吸，我们有时也就吸个三分之二体积就够了。。。
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9楼2008-04-30 08:29:00
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playboy723

金虫 (正式写手)
呵呵  菌太多了 没有完全裂解开   下次少提点儿菌  或者裂解液加倍   裂解充分的标准是加完solution2之后  混匀   溶液澄清透明  如果仍然混浊则再加裂解液
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10楼2008-04-30 10:22:40
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