| 查看: 559 | 回复: 5 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
hongkaichen金虫 (小有名气)
|
[交流]
求助！关于PCR的。
|
||
|
我想问下P出这样的图是由什么原因引起的，老P不出来，我的加样情况是：DNA 1ul ,引物 1ul ，mgcl2 3ul,buffer 5ul,tag 0.5ul. 设置程序是： 94 5-10min 94 1 min 50-54 1-2min 72 1-2min cycle 30 72 5min 8 保存 做了好多次，上面的1-2，是指有1min和2min都做过，50度到54度也做过，开始还P出来过一点好淡的带，现在一点都没了，请各位给予指教！ |
回复此楼» 猜你喜欢
售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急
已经有5人回复
-
售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急
已经有23人回复
-
售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急
已经有22人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急
已经有7人回复
-
售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急
已经有5人回复
-
售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急
已经有8人回复
-
售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急
已经有14人回复
-
售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急
已经有11人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急
已经有10人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急
已经有10人回复
xiaoli8609
银虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 427.1
- 散金: 21
- 帖子: 170
- 在线: 31小时
- 虫号: 295093
- 注册: 2006-11-11
- 专业: 生物大分子结构与功能
4楼2008-04-29 18:24:44
参考意见
|
首先，上面那块胶是否有加marker?如果加了marker，但是现在看来连marker都没有，这么说可能就是电泳的问题。下方那块小胶，左边的是Marker吗? 如果是的话，marker就没有跑好，电泳的效果就不好，所以首先要确定是否是电泳操作的问题。电泳缓冲液、制胶和电压等操作细节务必注意。 请问“退火温度50-54 1-2min”，具体如何调整这个范围的？请问这个退火温度是如何确定的，能给出你的引物序列吗？以及产物片段多少bp? 下图有非特意扩增条带，我曾经试过退火温度不适合，就出现了以上情况，退火温度的选择应根据文献报道，如果是自己设计的引物，就从比引物的Tm值低5度开始试验，每次提高2度，然后根据条带结果再细致调整。 上面一幅图，呈现明显的非常模糊的带型。目的产物条带呈不清晰的成片条带，一般可能是引物浓度不合适和Mg2+浓度不合适，造成无效延伸。你只给出了加入MgCl2的体积，但是总的反应体积是？Mg2＋的浓度是很重要的。通过建立降落PCR系列试验，摸索最佳镁离子浓度的水平 只是我自己的一点经验，有不足之处还希望指正^_^ |
2楼2008-04-29 17:18:19
3楼2008-04-29 17:55:03
5楼2008-04-30 08:21:19
