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关于基因克隆和植物表达载体的一些问题
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我想克隆一个基因连接到植物表达载体上，转化植物，分别从基因组和CDNA上克隆。 1、直接从外显子边缘扩增，比如说只扩增CDS区，会不会有转化以后不能正常表达的问题？因为我听说，必须要从非编码区扩增，不然可能不表达。 2、如果设计引物的时候要往两端的非编码区UTR进行，那么3'-UTR和5'-UTR大概要多长？各50-100bp左右够吗？ 3、如果不需要扩增UTRSs，那么为了保证测序结果的准确性，需要在我的目的基因两端都加上一点序列吗？因为说公司的测序结果在测序样两端的碱基结果存在一定的错误率，所以为了验证我的基因是不是完全正确，需要两端多加一点序列，方便对测序结果进行比对。 |
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