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关于基因克隆和植物表达载体的一些问题
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我想克隆一个基因连接到植物表达载体上,转化植物,分别从基因组和CDNA上克隆。 1、直接从外显子边缘扩增,比如说只扩增CDS区,会不会有转化以后不能正常表达的问题?因为我听说,必须要从非编码区扩增,不然可能不表达。 2、如果设计引物的时候要往两端的非编码区UTR进行,那么3'-UTR和5'-UTR大概要多长?各50-100bp左右够吗? 3、如果不需要扩增UTRSs,那么为了保证测序结果的准确性,需要在我的目的基因两端都加上一点序列吗?因为说公司的测序结果在测序样两端的碱基结果存在一定的错误率,所以为了验证我的基因是不是完全正确,需要两端多加一点序列,方便对测序结果进行比对。 |
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虫四
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