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请问western blot检测信号通路时，未活化和活化样品的活化水平如何做出显著性差异？ 已有1人参与
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本人做western blot检测信号通路（不限哪一种通路分子）时，总是做不出文献中的差异显著的活化条带，很苦恼 。文献中，未活化样品的条带几乎看不见，而活化样品一般可见随着时间进程会有明显的增强（或减弱），但这对于我而言实在是可望而不可及的结果。我用抑制剂处理时可以看到条带被显著抑制，但正常培养的情况下信号通路都是被活化的，根本没看到过未刺激时不活化的状况。 是不是需要改变培养条件比如用无血清培养基处理24小时？做WB时是不是要尽量缩短曝光时间和降低抗体使用浓度？有什么诀窍在里面呢？ 我感觉对信号通路的活化还有些根本认识上的问题，可能是造成做不出理想结果的原因。恳请各位大侠指导！ |
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2楼2015-01-19 14:40:11