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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 求赐教，扩增3000bp片段是用高保真Taq酶好，还是用高保真再加A尾好一点？
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ltf329395464

金虫 (初入文坛)
看你后期的需求，做表达的话，还是做高保真吧。3000要是接近4000连TA还不大好连呢……
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ONLY I CAN !
21楼2014-10-01 13:48:23
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duoyidian

木虫 (正式写手)
PFU很贵吗？实验室应该能够支付得起吧
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22楼2014-10-01 22:26:35
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ggyy0911

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
22楼: Originally posted by duoyidian at 2014-10-01 22:26:35
PFU很贵吗？实验室应该能够支付得起吧

倒也不是贵吧，其实后来发现
高保真Taq酶比Pfu贵……这两天先拿高保真试了，确实扩增能力一般。5u的上样量不及Taq酶1u的条带亮。

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23楼2014-10-02 00:00:41
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ggyy0911

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
21楼: Originally posted by ltf329395464 at 2014-10-01 13:48:23
看你后期的需求，做表达的话，还是做高保真吧。3000要是接近4000连TA还不大好连呢……

那连什么好连？平末端会更容易些吗？

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24楼2014-10-02 00:12:35
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duoyidian

木虫 (正式写手)
引用回帖:
23楼: Originally posted by ggyy0911 at 2014-10-02 00:00:41
倒也不是贵吧，其实后来发现
高保真Taq酶比Pfu贵……这两天先拿高保真试了，确实扩增能力一般。5u的上样量不及Taq酶1u的条带亮。
...

建议你可以尝试尝试无缝克隆，无论粘性末端还是非粘性末端，都是可以进行与载体连接的
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25楼2014-10-02 02:51:51
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mamadexiao

木虫 (正式写手)
我用的是Takara的Gxl primerstar，效果很好，然后胶回收产物加A
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26楼2014-10-03 01:20:23
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fuchange918

木虫 (正式写手)
引用回帖:
26楼: Originally posted by mamadexiao at 2014-10-03 01:20:23
我用的是Takara的Gxl primerstar，效果很好，然后胶回收产物加A

能不能详细说一下啊，谢谢了
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27楼2014-10-03 20:06:21
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calorimetry

铜虫 (正式写手)
建议超过1000NT的DNA单链扩增用高保真的扩增酶，非要普通PCR，建议使用热启动方式。
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28楼2015-06-01 13:36:54
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