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白色帝企鹅

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR结果不稳定，一会儿P不出来，再做一次又P出来了，又做一次条带大小又不对了 已有6人参与

到底是怎么回事，真心给跪了，求大神指导
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1楼 2014-09-28 21:06:10
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意萧02

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

这个问题我也遇到过，第一个原因可能是引物特异性不好，要提高特异性，可以用touch down或者slowdown试试。第二个原因我也说不清楚，就是你点个3-5ul看看，有时候点样点多了也会造成没有目的条带，特别是胶回收的时候，经常可能会没有目的条带。第三个就是引物设计问题，再设一次或者让别人设一对也试试！

[ 发自小木虫客户端 ]
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12楼2014-11-02 08:51:08
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-09-28 23:38:18
原因很多，要逐一排除，模板纯度及浓度，PCR反应条件是否合适，引物是否合适。
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2楼2014-09-28 22:16:37
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bwangel

银虫 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-10-01 12:48:59
引物扩增效率不好，外加引物不特异，
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3楼2014-09-29 07:33:49
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白色帝企鹅

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by stone2239 at 2014-09-28 22:16:37
原因很多，要逐一排除，模板纯度及浓度，PCR反应条件是否合适，引物是否合适。

模板使用Kit抽的，浓度也还行，条件是之前摸过的，而且之前师姐做过，引物应该没问题啊？
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4楼2014-09-29 10:24:23
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