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ddz_19897金虫 (正式写手)
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[求助]
pEGFP-N1空载体用xhoI、NheI单酶切或者双酶切都切不开？
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我最近在做一个实验，把目的基因从已有载体上切下来，连到新的载体上，遇到一些问题，求助于各位： 1. pEGFP-N1空载体大小是4.7kb，跑胶可以看到两条带，一条在实际大小位置，亮度很低，另一条在2kb多，很亮。 2. pEGFP-N1空载体用xhoI、NheI单酶切或者双酶切都切不开或者酶切效率特别低，切完跑胶发现条带与未切的几乎一样。 3. 回收实际大小位置较暗的条带，测浓度只有3ng/ul。回收目的基因测浓度15ng/ul，连接后转化涂板没有长菌。 根据以上情况，我想求助的问题是：1. 载体跑出来的条带是正常的吧？ 2. 不论是单酶切还是双酶切，如果能切开，实际大小位置的条带应该更亮，对吗？ 3. 没有长菌是说明回收的条带是切开了吗？ 不甚感激。 |
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