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ddz_19897

金虫 (正式写手)

[求助] pEGFP-N1空载体用xhoI、NheI单酶切或者双酶切都切不开?

我最近在做一个实验,把目的基因从已有载体上切下来,连到新的载体上,遇到一些问题,求助于各位:
1. pEGFP-N1空载体大小是4.7kb,跑胶可以看到两条带,一条在实际大小位置,亮度很低,另一条在2kb多,很亮。

2. pEGFP-N1空载体用xhoI、NheI单酶切或者双酶切都切不开或者酶切效率特别低,切完跑胶发现条带与未切的几乎一样。

3. 回收实际大小位置较暗的条带,测浓度只有3ng/ul。回收目的基因测浓度15ng/ul,连接后转化涂板没有长菌。

根据以上情况,我想求助的问题是:1. 载体跑出来的条带是正常的吧?
                                                        2. 不论是单酶切还是双酶切,如果能切开,实际大小位置的条带应该更亮,对吗?
                                                        3. 没有长菌是说明回收的条带是切开了吗?

不甚感激。
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