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superwheat

银虫 (正式写手)

[交流] 【求助】请教一下sf9细胞的培养条件和经验

ATCC不知道为什么,怎么也打不开。

是不是要33度,5%CO2培养的?
此外,我往上查到有些人用无血清合成培养基,有些是加了10%的血清,究竟需不需要加血清培养,效果有什么不同呢?我还看到有专门的昆虫细胞培养血清,又没有必要买呢?
还有肝素,水解乳蛋白,酵母,是不是都要添加的?
还有如果用无血清培养,冻存细胞的时候需不需要添加20%的血清呢?

我需要做蛋白表达,我看到有人说直接把细胞培养出来的病毒回收,加到新细胞里面就可以了感染和表达蛋白了,但有看过一个说法是要培养p1,p2,p3代以后才能用来感染细胞,我有点迷惑。

另外,是否无血清培养表达蛋白的时候,需要添加蛋白酶抑制剂呢?

[ Last edited by superwheat on 2008-4-25 at 15:47 ]
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sevenlight967

银虫 (小有名气)

1. 要不要加血清。
 depends on 你的细胞来源。有的sf9细胞需要血清,有的已经adapted不再用血清。你也可以自己adapt要血清的sf9细胞至不用血清。去invitrogen上查吧,原来是gibco的,后来invitrogen收购了
2. 关于培养的一些问题
 同上,查公司的instruction
3. P1, P2, P3是为了提高病毒的滴度。理论上讲P3>P2>P1. 但也不一定,所以每次最好检测病毒的滴度。
4. 培养的时候当然不用加蛋白酶抑制剂了。分离纯化的时候再加
4楼2008-04-29 01:59:26
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黑罕

金虫 (小有名气)

我是这么做的
是28度5%CO2培养
加血清的GRACE培养
要培养p1,p2,p3代
2楼2008-04-28 16:59:52
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superwheat

银虫 (正式写手)

请教一下,P1P2P3代其实是代表什么意思的?这样做是为了什么呢?
3楼2008-04-29 00:54:06
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savid888

木虫 (正式写手)

sf9我养过,来自于草地滩夜蛾,还有一个克隆株sf21。
很好养,Grace培养基就可,需要添加水解乳蛋白,血清就是普通的胎牛血清,10%浓度。28摄氏度,不需CO2条件下培养。
如果你要表达纯化蛋白的话,应该选用无血清培养基,当然要经过一个驯化的过程。
5楼2008-04-29 10:31:08
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