应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 关于连接的问题
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
51/1返回列表
查看: 513  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

playboy723

金虫 (正式写手)

[交流] 关于连接的问题

各位高手：
请教一个问题，我要做一个连接  用的是双酶切   EcoR1  和Xho1  10微升体系，  好像Xho1连接较困难（需用平端连的条件）   于是我就改变了一下连接体系T4 buffer  1
   T4 ligase   0.75
    ATP     1
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2008-04-24 11:59:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fairytale527

★
reasonspare(金币+1,VIP+0):积极交流奖
我也是用双酶切   EcoR1  和Xho1
连接25度3小时
效果就很好啊，也不会有自连产物的呀。
用连接酶和buffer,没有加过ATP哦。我用的是天根公司的连接酶和buffer
赞一下(10人) 回复此楼
5楼2008-04-24 14:43:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

playboy723

金虫 (正式写手)
各位高手：
请教一个问题，我要做一个连接  用的是双酶切   EcoR1  和Xho1  10微升体系，  好像Xho1连接较困难（需用平端连的条件）   于是我就改变了一下连接体系
T4 buffer  1
   T4 ligase   0.75
    ATP     1
   载体和PCR产物片段  7.25（比例约为1：3－10）
然后28 度2.5小时   
结果转化后没有菌落  
我想请教一下 我的体系合适吗  应该怎样改进一下
另外是否必须得16度过夜吗   我28度2小时可以吗  我现在搞不清楚到底是哪里出错了   求教     希望大家不吝赐教
赞一下 回复此楼
2楼2008-04-24 12:02:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sevenlight967

银虫 (小有名气)
自连产物都没有？
你的感受态好用不？
赞一下 回复此楼
3楼2008-04-24 12:18:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

playboy723

金虫 (正式写手)
自连有用吗  如果有自连的话就会有克隆了
感受态好使   确信
赞一下 回复此楼
4楼2008-04-24 13:26:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 生物学学硕，一志愿湖南大学，初试成绩338 +6 YYYYYNNNNN 2026-03-26 7/350 2026-03-28 20:52 by 唐沐儿
[考研] 311（085601）求调剂 +4 liziyeyeye 2026-03-28 4/200 2026-03-28 18:50 by 535743368
[考研] 压国家一区线，求导师收留，有恩必谢！ +7 迷人的哈哈 2026-03-28 7/350 2026-03-28 16:47 by 催化大白
[考研] 材料与化工272求调剂 +9 阿斯蒂芬2004 2026-03-28 9/450 2026-03-28 15:21 by 1018329917
[考研] 320分，材料与化工专业，求调剂 +9 一定上岸aaa 2026-03-27 13/650 2026-03-28 15:00 by 神马都不懂
[考研] 291求调剂 +6 HanBeiNingZC 2026-03-24 6/300 2026-03-28 07:55 by baoball
[考研] 308求调剂 +7 墨墨漠 2026-03-27 7/350 2026-03-28 07:43 by 热情沙漠
[考研] 材料求调剂 一志愿哈工大总分298分，前三科223分 +5 dongfang59 2026-03-27 5/250 2026-03-28 04:53 by wxiongid
[考研] 求调剂 +8 张zz111 2026-03-27 9/450 2026-03-28 03:41 by fmesaito
[考研] 266分求材料化工冶金矿业等专业的调剂 +4 哇呼哼呼哼 2026-03-26 4/200 2026-03-27 17:02 by zhyzzh
[考研] 一志愿 西北大学 总分282 英语一62 求调剂 +7 18419759900 2026-03-25 8/400 2026-03-27 16:38 by 18419759900
[考研] 333求调剂 +3 question挽风 2026-03-23 3/150 2026-03-27 11:29 by 不吃魚的貓
[考研] 359求调剂 +4 王了个楠 2026-03-25 4/200 2026-03-27 08:43 by 不吃魚的貓
[考研] 343求调剂 +4 赠我一本书 2026-03-23 4/200 2026-03-27 00:40 by wxiongid
[考研] 0703化学求调剂 +3 丹青奶盖 2026-03-26 5/250 2026-03-26 20:11 by macy2011
[考研] 334分 一志愿武理 材料求调剂 +4 李李不服输 2026-03-26 4/200 2026-03-26 16:00 by 不吃魚的貓
[考研] 086003食品工程求调剂 +6 淼淼111 2026-03-24 6/300 2026-03-25 10:29 by 3Strings
[考研] 269求调剂 +4 我想读研11 2026-03-23 4/200 2026-03-23 21:25 by pswait
[论文投稿] 急发核心期刊论文 +3 贤达问津 2026-03-23 5/250 2026-03-23 17:13 by 妹子不好惹
[考研] 求老师收我 +3 zzh16938784 2026-03-23 3/150 2026-03-23 12:56 by ztnimte
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭