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至尊木虫 (知名作家)
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RXMCDM: 金币+1, 多谢应助! 2014-09-24 12:30:57
AnnF: 金币+40, 翻译EPI+1, ★★★★★最佳答案 2014-09-24 20:45:55
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在单核细胞中DH-PS诱导产生IL-1ra的细胞内信号途径 为研究介导DH-PS诱导IL-1ra表达的细胞内信号途径,我们利用各种蛋白激酶的抑制剂,包括ERK/ELK(PD98059),JNK(SP600125),p38 MAPK(SB203580),PI3K(LY294002)和NFκB抑制剂(Helenalin和MG132),这些抑制剂的使用浓度对细胞无毒性(Fig.S1)。 THP-1细胞(图8A)或人CD14+细胞(图8B)预先用不同浓度的这些抑制剂或DMSO作对照处理60分钟,然后向培养基中加入DH-PS(100微克/毫升)继续培养18小时。在THP-1和人CD14+细胞中,ERK/ELK,JNK,p38 MAPK,PI3K和NFκB的抑制剂降低IL-1ra的分泌,且呈剂量依赖性。为了确定这些信号分子是否在转录水平上调节了IL-1ra,用给定浓度抑制剂或DMSO预处理THP-1细胞60分钟,再用含DH-PS(100微克/毫升)的培养基继续培养12小时。用RT-PCR检测IL-1ra mRNA的表达水平。结果表明,ERK/ELK,PI3K和NFκB(Helenalin)的抑制剂抑制IL-1ra mRNA的表达(图8C),这与在蛋白水平得到的有关IL-1ra产生的结果(图8A)是一致的。另一方面,JNK和p38 MAPK的抑制剂对IL-1ra mRNA表达无显著效果。 DH-PS比F3(灵芝)诱导更多IL-1ra 灵芝是一种用了几个世纪的中草药,主要用于治疗包括炎症和癌症等多种疾病[28]。 F3是灵芝多糖提取物,已被报道在小鼠具有免疫调节功能并诱导IL-1ra【27】。因此,我们研究了DH-PS或F3对人CD14+细胞和THP-1细胞产生IL-1ra的诱导作用以及IL-1ra mRNA在THP-1细胞表达的动力学。人CD14+细胞(图9A)和THP-1细胞(图9C)与不同浓度的DH-PS或F3培养18小时。同时研究了CD14+细胞经DH-PS和F3(100微克/毫升)处理后IL-1ra分泌的动力学(图9B)。如图9A和9C所示,DH-PS和F3都可以诱导IL-1ra的产生,且具有剂量依赖性特点,但DH-PS诱导的最大水平是F3的2.2倍,这在CD14 +和THP-1细胞是一致的。至于在CD14+细胞中IL-1ra诱导的动力学,DH-PS的诱导作用比F3更快且诱导程度更大,在3,24和48小时时对IL-1ra的诱导分别是1.4,1.7和2.0倍,72小时时达2.1倍(图9B)。我们还研究了DH-PS或F3在THP-1细胞对IL-1ra mRNA表达的动力学。如图9D所示,DH-PS对IL-1ra mRNA诱导程度比F3更高,这和ELISA数据是一致的。另一方面,F3在三个健康供体所提供的CD14+细胞中比DH-PS诱导产生更多IL-1β:F3对IL-1β的诱导(366皮克/毫升,约为PBS对照的52倍)(Fig.S3);DH-PS对IL-1β的诱导(3个健康供体分别为55,24和70皮克/毫升图4)。 |
2楼2014-09-24 00:11:48













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