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RXMCDM: 金币+1, 多谢应助！ 2014-09-24 12:30:57
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在单核细胞中DH-PS诱导产生IL-1ra的细胞内信号途径 为研究介导DH-PS诱导IL-1ra表达的细胞内信号途径，我们利用各种蛋白激酶的抑制剂，包括ERK/ELK（PD98059），JNK（SP600125），p38 MAPK（SB203580），PI3K（LY294002）和NFκB抑制剂（Helenalin和MG132），这些抑制剂的使用浓度对细胞无毒性（Fig.S1）。 THP-1细胞（图8A）或人CD14+细胞（图8B）预先用不同浓度的这些抑制剂或DMSO作对照处理60分钟，然后向培养基中加入DH-PS（100微克/毫升）继续培养18小时。在THP-1和人CD14+细胞中，ERK/ELK，JNK，p38 MAPK，PI3K和NFκB的抑制剂降低IL-1ra的分泌，且呈剂量依赖性。为了确定这些信号分子是否在转录水平上调节了IL-1ra，用给定浓度抑制剂或DMSO预处理THP-1细胞60分钟，再用含DH-PS（100微克/毫升）的培养基继续培养12小时。用RT-PCR检测IL-1ra mRNA的表达水平。结果表明，ERK/ELK，PI3K和NFκB（Helenalin）的抑制剂抑制IL-1ra mRNA的表达（图8C），这与在蛋白水平得到的有关IL-1ra产生的结果（图8A）是一致的。另一方面，JNK和p38 MAPK的抑制剂对IL-1ra mRNA表达无显著效果。 DH-PS比F3（灵芝）诱导更多IL-1ra 灵芝是一种用了几个世纪的中草药，主要用于治疗包括炎症和癌症等多种疾病[28]。 F3是灵芝多糖提取物，已被报道在小鼠具有免疫调节功能并诱导IL-1ra【27】。因此，我们研究了DH-PS或F3对人CD14+细胞和THP-1细胞产生IL-1ra的诱导作用以及IL-1ra mRNA在THP-1细胞表达的动力学。人CD14+细胞（图9A）和THP-1细胞（图9C）与不同浓度的DH-PS或F3培养18小时。同时研究了CD14+细胞经DH-PS和F3（100微克/毫升）处理后IL-1ra分泌的动力学（图9B）。如图9A和9C所示，DH-PS和F3都可以诱导IL-1ra的产生，且具有剂量依赖性特点，但DH-PS诱导的最大水平是F3的2.2倍，这在CD14 +和THP-1细胞是一致的。至于在CD14+细胞中IL-1ra诱导的动力学，DH-PS的诱导作用比F3更快且诱导程度更大，在3,24和48小时时对IL-1ra的诱导分别是1.4，1.7和2.0倍，72小时时达2.1倍（图9B）。我们还研究了DH-PS或F3在THP-1细胞对IL-1ra mRNA表达的动力学。如图9D所示，DH-PS对IL-1ra mRNA诱导程度比F3更高，这和ELISA数据是一致的。另一方面，F3在三个健康供体所提供的CD14+细胞中比DH-PS诱导产生更多IL-1β：F3对IL-1β的诱导（366皮克/毫升，约为PBS对照的52倍）（Fig.S3）；DH-PS对IL-1β的诱导（3个健康供体分别为55，24和70皮克/毫升图4）。 |
2楼2014-09-24 00:11:48
