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缔结云开

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 326
帖子: 10
在线: 4.6小时
虫号: 3392532
注册: 2014-09-01
专业: 生物大分子结构与功能

[求助] PUZ8002粒电化JTU007菌，对照组在卡那和氯霉素双抗板上也出现菌落？

求助：之前第一次在卡那抗性（45ug/ml）中对ET12567/PUZ8002菌摇床提取质粒，取3微升电转化JTU007菌后，同时以无质粒的JTU007感受态为对照组都活化后，涂布卡那抗性（45ug/ml）平板，第二天发现对照组和实验组都出现了很多菌落。然后从ET12567/PUZ8002、原始JTU007菌和转化平板上随意挑取的菌落于Kana抗性中摇床后提质粒/酶切后发现,质粒条带都很淡，只有从ET菌中提取的质粒有微弱的酶切条带，而且所有的都有拖尾老师说是背景基因组DNA造成的。一开始怀疑是Kana抗生素的问题，但是换过抗生素后，对照组对应平板还是出现很多菌落。
看资料说是在养ET菌时，还要再加抗生素，然后我就第三次地在氯霉素和Kana抗性环境养菌提取质粒，浓度依然很低，而且再次电转化涂布Chl+Kana抗性(24/45ug/ml)板后过夜培养，对照板依旧出现很多菌落。我都不知道怎么办，老师说是ET菌中PUZ8002质粒有四环素抗性，建议用四环素，我怕用过之后，依然失望，有没有大侠给与指点，不剩感激，下面附上质粒及酶切图。

20140919.jpg