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yw的小号

铁虫 (小有名气)

[求助] 做ELISA,都是加入TMB室温反应15-20min,那HRP催化H2O2的最适温度就是室温(25度)吗? 已有1人参与

做了这么长时间的ELISA从来都没考虑过这个问题。
一般都是:
加TMB在室温下反应15-20min,(虽然实验室温度也会有波动,但是从来没管过)
再加终止剂

那么HRP催化(H2O2/TMB)的最适温度就是室温(25度)吗。高一点的话,会不会速度更化,显色更明显呢?
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求有探索精神的大神们解释!
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biotech_zhou

木虫 (著名写手)

待人以诚:专业/专注/专心

【答案】应助回帖

显色一般控制在半小时以内,温度提高能缩短显色时间,至于显色明显不明显这要看你待测物的含量,顺带问一句LZ做了多长时间的ELISA?
年末优惠荧光定量pcr、WB、ELISA技术服务一律六折!交流锤炼知识,用心构筑桥梁,以更优质的产品及技术服务助力科研;QQ:2513165427;Email:b
2楼2014-09-25 16:49:55
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yw的小号

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by biotech_zhou at 2014-09-25 16:49:55
显色一般控制在半小时以内,温度提高能缩短显色时间,至于显色明显不明显这要看你待测物的含量,顺带问一句LZ做了多长时间的ELISA?

我想问的是有没有专门研究HRP催化H2O2—TMB机理的,查到的HRP的最佳温度说法都不一致。
我们主要做抗体,所以对显色机理什么的不了解。
ELISA硕博加起来5,6年吧,当然不能跟那些大牛人比啦
3楼2014-09-30 21:06:44
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