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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 医学 » 综合其他 » 做ELISA,都是加入TMB室温反应15-20min，那HRP催化H2O2的最适温度就是室温（25度）吗?
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yw的小号

铁虫 (小有名气)

[求助] 做ELISA,都是加入TMB室温反应15-20min，那HRP催化H2O2的最适温度就是室温（25度）吗? 已有1人参与

做了这么长时间的ELISA从来都没考虑过这个问题。
一般都是：
加TMB在室温下反应15-20min，（虽然实验室温度也会有波动，但是从来没管过）
再加终止剂

那么HRP催化（H2O2/TMB）的最适温度就是室温（25度）吗。高一点的话，会不会速度更化，显色更明显呢？
没搜到类似文章。
求有探索精神的大神们解释！
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1楼 2014-09-17 22:51:54
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biotech_zhou

木虫 (著名写手)

待人以诚：专业/专注/专心

【答案】应助回帖

显色一般控制在半小时以内，温度提高能缩短显色时间，至于显色明显不明显这要看你待测物的含量，顺带问一句LZ做了多长时间的ELISA？
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年末优惠荧光定量pcr、WB、ELISA技术服务一律六折！交流锤炼知识，用心构筑桥梁，以更优质的产品及技术服务助力科研；QQ：2513165427；Email：b
2楼2014-09-25 16:49:55
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yw的小号

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by biotech_zhou at 2014-09-25 16:49:55
显色一般控制在半小时以内，温度提高能缩短显色时间，至于显色明显不明显这要看你待测物的含量，顺带问一句LZ做了多长时间的ELISA？

我想问的是有没有专门研究HRP催化H2O2—TMB机理的，查到的HRP的最佳温度说法都不一致。
我们主要做抗体，所以对显色机理什么的不了解。
ELISA硕博加起来5，6年吧，当然不能跟那些大牛人比啦
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3楼2014-09-30 21:06:44
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