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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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张志敏1987

铜虫 (初入文坛)

[求助] 沙门氏菌总蛋白的提取!急需帮助!

我的提取步骤:
1、将培养至对数生长期的细菌移至离心管,8000转离心15min;
2、用5%山梨醇重悬清洗4次;
3、按每20mg湿重菌体加500ul裂解液,超声裂解,超声条件300w,10s/10s,直至变清;
4、4度,18000转离心60min,取上清快速转到预冷的管中,置于-80度储存。
裂解液配方:尿素 4.2g
                     硫脲  1.52g
                     CHAPS 0.4g
                     加水至10ml,溶解,分装成1ml,10管
                     临用前加入0.0098g/ml 的DTT
                                      和蛋白酶抑制剂10ul/ml
请问我哪里不合适,导致蛋白质量不好,跑出二维电泳的图一直不好!
请各位大侠指教,谢谢!
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以积极沉稳的心态面对科研、面对生活
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weebug

版主 (著名写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 张志敏1987 at 2014-09-17 11:11:43
蛋白点少,不明显,杂带也很多!我觉得是我样品提取的问题,请问沙门氏菌总蛋白的提取怎么提比较好呢?...

网上有很多关于提取外壁蛋白的方法(Outer Membrane Protein),就不知道这是不是你要的部分。
天蓝蓝兮日头晒
4楼2014-09-17 11:51:37
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weebug

版主 (著名写手)

质量不好指的是没有目标蛋白,目标蛋白不明显,还是很多杂带?
天蓝蓝兮日头晒
2楼2014-09-16 21:16:35
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张志敏1987

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by weebug at 2014-09-16 21:16:35
质量不好指的是没有目标蛋白,目标蛋白不明显,还是很多杂带?

蛋白点少,不明显,杂带也很多!我觉得是我样品提取的问题,请问沙门氏菌总蛋白的提取怎么提比较好呢?
以积极沉稳的心态面对科研、面对生活
3楼2014-09-17 11:11:43
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