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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 镍柱纯化蛋白，遇到史上最顽固的杂蛋白
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kuenyunliu

铜虫 (初入文坛)
一个镍柱能解决所有蛋白的问题那其他产品还用来干嘛
如果一定要拿到非常纯的蛋白样品的话，尝试多个柱子联用吧
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11楼2014-09-18 21:44:58
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ccandcc

木虫 (小有名气)
光用镍柱不纯很正常的，最简单的再来个分子筛柱！
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12楼2014-09-19 08:04:28
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ufoloveshe

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by zhenxiangkai at 2014-09-17 15:21:21
你可以尝试一下把填料的体积弄小点，或者里面加点甘油，TRIX-100 等减少非特异性聚集的东东，当然，你的还是不错的，后续还要过离子柱吗？分子筛？

嗯，要过。顺便问下你们都用什么方法测蛋白浓度
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抱怨是你应有的惩罚
13楼2014-09-19 08:55:14
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忘记将来

木虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by ufoloveshe at 2014-09-18 17:09:22
木有，还在探索中

在破碎buffer里加10-20mM咪唑试试
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14楼2014-09-19 08:59:38
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忘记将来

木虫 (正式写手)
引用回帖:
10楼: Originally posted by lpzl at 2014-09-18 18:04:12
我纯化后SDS-PAGE也有杂蛋白，还没解决呢。。。继续摸索中。...

镍柱 达不到完全纯化的目的的 肯定会有一些杂蛋白，要求高的话 除非你几个纯化方法连用
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15楼2014-09-19 09:00:54
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ufoloveshe

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by kuenyunliu at 2014-09-18 21:44:58
一个镍柱能解决所有蛋白的问题那其他产品还用来干嘛
如果一定要拿到非常纯的蛋白样品的话，尝试多个柱子联用吧

老板非说需要蛋白浓度达到百分之九十以上才让过分子筛，比较郁闷啊
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抱怨是你应有的惩罚
16楼2014-09-19 09:04:31
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lpzl

木虫 (正式写手)
引用回帖:
15楼: Originally posted by 忘记将来 at 2014-09-19 09:00:54
镍柱 达不到完全纯化的目的的 肯定会有一些杂蛋白，要求高的话 除非你几个纯化方法连用...

嗯，都试试吧。。。。
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Start_everyday_with_a_new_hope,_leave_bad_memories...
17楼2014-09-19 09:39:37
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ufoloveshe

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by ccandcc at 2014-09-19 08:04:28
光用镍柱不纯很正常的，最简单的再来个分子筛柱！

老板非让镍柱纯化到90%再过分子筛，很发愁啊
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抱怨是你应有的惩罚
18楼2014-09-19 09:45:25
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zhenxiangkai

金虫 (正式写手)
引用回帖:
13楼: Originally posted by ufoloveshe at 2014-09-19 08:55:14
嗯，要过。顺便问下你们都用什么方法测蛋白浓度...

如果只是定性 我们用考马斯亮蓝R-250 ，定量的话，用分光光度计或者nano drop
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19楼2014-09-19 11:21:26
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zhenxiangkai

金虫 (正式写手)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-09-19 16:28:01
引用回帖:
16楼: Originally posted by ufoloveshe at 2014-09-19 09:04:31
老板非说需要蛋白浓度达到百分之九十以上才让过分子筛，比较郁闷啊...

分子筛如果蛋白分子量接近的话，是分不开的，当然，如果差很多，就能分开，其实，分子筛的一个很重要的功能就是换液。估计你老板就是看你的分不开，所以换液
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20楼2014-09-19 11:23:49
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