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Veevaa

铜虫 (初入文坛)

[交流] 有关FRET实验方案求助

大家好
最近组里在做FRET，想通过两个蛋白相互作用与否，来筛选中药中影响这种相互作用的单体和组分。
我们大体的做法是：目的片段（两个GPCR）构建在真核表达载体上，载体上有CFP/YFP（文献报道的能够发生FRET的蛋白对）与目的片段融合，转染于293T细胞当中，通过Flexstation 3激发，期望通过检测FRET信号，判断细胞膜表达的两种GPCR是否结合，并进一步筛选中药中影响这种结合的单体和组分。

问题是：即使没有目的片段，直接把CFP和YFP放在一个载体里融合表达，也检测不到FRET信号。

工程师给的解答是荧光信号弱，要求蛋白纯化了再试，但我们是想在活细胞上做，这样的结果更有意义，所以一直在这儿卡着。

大家有没有做这方面实验的经验，可否分享一下？非常感谢！
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路
1楼 2014-09-15 10:19:22
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