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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸杂交 » pet28a 空质粒双酶切图像问题
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
95846713(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-09-11 15:56:04
引用回帖:
10楼: Originally posted by 95846713 at 2014-09-11 11:16:30
哦  我也核对了 别人的确实是插入了外源基因  我是新手 看的比较马虎 那像我BamH I和Hind iii这样双酶切空质粒pet28a 一般也就几十bp吧，一般电泳是看不到了，我是不是只有双酶切空质粒后再比对没有酶切的空质粒 才 ...

这两个位点相隔25个碱基，所以电泳区分不出来是否已经完全双酶切，只要酶切条件没问题，一般不会有问题的。
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11楼2014-09-11 13:05:55
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whh2013

金虫 (正式写手)
最好换两个距离远的酶进行酶切
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12楼2014-09-11 20:27:29
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欧阳-90

银虫 (小有名气)
没看到你说的小条带啊
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13楼2014-09-12 14:50:57
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12101008

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 95846713 at 2014-09-11 11:16:30
哦  我也核对了 别人的确实是插入了外源基因  我是新手 看的比较马虎 那像我BamH I和Hind iii这样双酶切空质粒pet28a 一般也就几十bp吧，一般电泳是看不到了，我是不是只有双酶切空质粒后再比对没有酶切的空质粒 才 ...

其实都不怎么能看出来，电泳图反应的是核酸碱基的量的多少，质粒那么大的片段掉那么少一点碱基下来，从量上面可能无法看到小片段，大片段的长度可能也看不出来变化
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14楼2014-09-12 23:38:38
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95846713

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
14楼: Originally posted by 12101008 at 2014-09-12 23:38:38
其实都不怎么能看出来，电泳图反应的是核酸碱基的量的多少，质粒那么大的片段掉那么少一点碱基下来，从量上面可能无法看到小片段，大片段的长度可能也看不出来变化...

哦   是这样啊  谢谢
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15楼2014-09-15 09:38:38
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95846713

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
11楼: Originally posted by stone2239 at 2014-09-11 13:05:55
这两个位点相隔25个碱基，所以电泳区分不出来是否已经完全双酶切，只要酶切条件没问题，一般不会有问题的。...

哦  谢谢
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16楼2014-09-15 09:41:51
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