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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸杂交 » 两条互补的单链DNA（30bp)退火杂交
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Long-jiabao

新虫 (小有名气)

[求助] 两条互补的单链DNA（30bp)退火杂交 已有3人参与

两条互补的单链DNA（30bp),等比例混合在buffer中，95度，5min,然后自然冷却到室温 ，我想问的是室温下要放置多久才能完全杂交。还有需要加多少镁离子浓度？
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1楼 2014-09-09 15:57:52
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a50044758

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
Long-jiabao(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-09-10 18:23:44
Long-jiabao: 金币+1, ★有帮助 2014-09-10 18:30:48
这个我经常做，在PCR仪里面退火，95度变性5min，然后降温到15度，取出来就可以了，要保证降温时间在20min以上，越长越好，关于离子的问题不用纠结，你把10x 的PCR buffer按比例加进去就可以了。
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11楼2014-09-10 16:18:02
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1057910381

金虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-09-09 19:36:50
25℃ at 5℃/min  退火就可以了
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2楼2014-09-09 16:42:26
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Long-jiabao

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 1057910381 at 2014-09-09 16:42:26
25℃ at 5℃/min  退火就可以了

哦  我想知道有没有做过就是95度5min的 要放置在25度多久
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3楼2014-09-09 19:30:28
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bio_sci

捐助贵宾 (正式写手)
同问，放多久

[ 发自小木虫客户端 ]
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4楼2014-09-09 20:16:17
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