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xuelvsnow

新虫 (小有名气)

[交流] 大家好，请教一个关于愈创木酚法染Native 电泳，为什么粉色条带很快就消失了？

我用的是0.2M的PBS，用40度水超声溶解愈创木酚，放在冰箱内，等给胶染色时，再加的过氧化氢，置于玻璃皿中，过了一会儿，出现一个粉色条带，第二天再看就什么都没有了，我想知道是因为这个反应很快，反应完了，颜色也就消失了吗？  如果要想保留现象，应该是怎么做好呢？谢谢大家的帮助了
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1楼 2014-09-05 08:22:00
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lpzl

木虫 (正式写手)
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想问下，lz的Native 电泳是怎么做的？学习下。。。
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2楼2014-09-05 09:16:55
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xuelvsnow

新虫 (小有名气)
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2楼: Originally posted by lpzl at 2014-09-05 09:16:55
想问下，lz的Native 电泳是怎么做的？学习下。。。

你应该会做SDS电泳吧，步骤基本一样，就是电极缓冲液中不加SDS，配胶时，A液不变，B，C中不加SDS。上样缓冲液中不加DDT，总之所有使蛋白变性的试剂都不加，其他的和SDS-PAGE一样。我们用的是伯乐的制胶器，跑电泳的时候放在冰箱里，4度，防止产热使蛋白变性。最后MARK是用于NATIVE电泳的。还有就是即使溴酚蓝跑出去了，蛋白也不一定跑好呢，跑电泳的时间自己摸索一下，才能得到理想的条带，希望对你有帮助。
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3楼2014-09-23 14:44:28
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lpzl

木虫 (正式写手)
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3楼: Originally posted by xuelvsnow at 2014-09-23 14:44:28
你应该会做SDS电泳吧，步骤基本一样，就是电极缓冲液中不加SDS，配胶时，A液不变，B，C中不加SDS。上样缓冲液中不加DDT，总之所有使蛋白变性的试剂都不加，其他的和SDS-PAGE一样。我们用的是伯乐的制胶器，跑电泳的 ...

SDS电泳这个会，不过我的配方是按照分子克隆上配置的，没有看到楼主说的A、B、C液，我们实验室用的也是伯乐的。之前看过国外一些文献，也照着做过，可就是跑的胶不行，蛋白生物技术（好像是这本书）上说蛋白酸性和碱性跑胶不一样，似乎说的挺复杂的。望楼主不吝赐教，非常感谢。
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4楼2014-09-24 09:54:18
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xuelvsnow

新虫 (小有名气)
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4楼: Originally posted by lpzl at 2014-09-24 09:54:18
SDS电泳这个会，不过我的配方是按照分子克隆上配置的，没有看到楼主说的A、B、C液，我们实验室用的也是伯乐的。之前看过国外一些文献，也照着做过，可就是跑的胶不行，蛋白生物技术（好像是这本书）上说蛋白酸性和 ...

http://pan.baidu.com/s/1kTp7xp9
这个是我们用的方法  ，估计网上也有，
酸性蛋白通常在非变性凝胶电泳中采用的pH是8.8的缓冲系统，蛋白会带负电荷，蛋白会相阳极移动；而碱性蛋白通常电泳是在微酸性环境下进行，蛋白带正电荷，这时候需要将阴极和阳极倒置才可以电泳。

http://pan.baidu.com/s/1hqFvXo4  这个也是我从网上找的 用于碱性蛋白的，但是我没有做过。我们的蛋白用pH8.8的缓冲系统就可以了。希望对你有帮助。
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5楼2014-09-24 14:14:22
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lpzl

木虫 (正式写手)
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5楼: Originally posted by xuelvsnow at 2014-09-24 14:14:22
http://pan.baidu.com/s/1kTp7xp9
这个是我们用的方法  ，估计网上也有，
酸性蛋白通常在非变性凝胶电泳中采用的pH是8.8的缓冲系统，蛋白会带负电荷，蛋白会相阳极移动；而碱性蛋白通常电泳是在微酸性环境下进行 ...

嗯，我去试试吧.....多谢！
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6楼2014-09-24 15:20:02
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