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新虫 (小有名气)

[交流] 大家好,请教一个关于愈创木酚法染Native 电泳,为什么粉色条带很快就消失了?

我用的是0.2M的PBS,用40度水超声溶解愈创木酚,放在冰箱内,等给胶染色时,再加的过氧化氢,置于玻璃皿中,过了一会儿,出现一个粉色条带,第二天再看就什么都没有了,我想知道是因为这个反应很快,反应完了,颜色也就消失了吗?  如果要想保留现象,应该是怎么做好呢?谢谢大家的帮助了
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lpzl

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
想问下,lz的Native 电泳是怎么做的?学习下。。。
Start_everyday_with_a_new_hope,_leave_bad_memories...
2楼2014-09-05 09:16:55
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新虫 (小有名气)

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2楼: Originally posted by lpzl at 2014-09-05 09:16:55
想问下,lz的Native 电泳是怎么做的?学习下。。。

你应该会做SDS电泳吧,步骤基本一样,就是电极缓冲液中不加SDS,配胶时,A液不变,B,C中不加SDS。上样缓冲液中不加DDT,总之所有使蛋白变性的试剂都不加,其他的和SDS-PAGE一样。我们用的是伯乐的制胶器,跑电泳的时候放在冰箱里,4度,防止产热使蛋白变性。最后MARK是用于NATIVE电泳的。还有就是即使溴酚蓝跑出去了,蛋白也不一定跑好呢,跑电泳的时间自己摸索一下,才能得到理想的条带,希望对你有帮助。
3楼2014-09-23 14:44:28
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lpzl

木虫 (正式写手)


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3楼: Originally posted by xuelvsnow at 2014-09-23 14:44:28
你应该会做SDS电泳吧,步骤基本一样,就是电极缓冲液中不加SDS,配胶时,A液不变,B,C中不加SDS。上样缓冲液中不加DDT,总之所有使蛋白变性的试剂都不加,其他的和SDS-PAGE一样。我们用的是伯乐的制胶器,跑电泳的 ...

SDS电泳这个会,不过我的配方是按照分子克隆上配置的,没有看到楼主说的A、B、C液,我们实验室用的也是伯乐的。之前看过国外一些文献,也照着做过,可就是跑的胶不行,蛋白生物技术(好像是这本书)上说蛋白酸性和碱性跑胶不一样,似乎说的挺复杂的。望楼主不吝赐教,非常感谢。
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4楼2014-09-24 09:54:18
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新虫 (小有名气)

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4楼: Originally posted by lpzl at 2014-09-24 09:54:18
SDS电泳这个会,不过我的配方是按照分子克隆上配置的,没有看到楼主说的A、B、C液,我们实验室用的也是伯乐的。之前看过国外一些文献,也照着做过,可就是跑的胶不行,蛋白生物技术(好像是这本书)上说蛋白酸性和 ...

http://pan.baidu.com/s/1kTp7xp9
这个是我们用的方法  ,估计网上也有,
酸性蛋白通常在非变性凝胶电泳中采用的pH是8.8的缓冲系统,蛋白会带负电荷,蛋白会相阳极移动;而碱性蛋白通常电泳是在微酸性环境下进行,蛋白带正电荷,这时候需要将阴极和阳极倒置才可以电泳。

http://pan.baidu.com/s/1hqFvXo4  这个也是我从网上找的 用于碱性蛋白的,但是我没有做过。我们的蛋白用pH8.8的缓冲系统就可以了。希望对你有帮助。
5楼2014-09-24 14:14:22
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lpzl

木虫 (正式写手)


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引用回帖:
5楼: Originally posted by xuelvsnow at 2014-09-24 14:14:22
http://pan.baidu.com/s/1kTp7xp9
这个是我们用的方法  ,估计网上也有,
酸性蛋白通常在非变性凝胶电泳中采用的pH是8.8的缓冲系统,蛋白会带负电荷,蛋白会相阳极移动;而碱性蛋白通常电泳是在微酸性环境下进行 ...

嗯,我去试试吧.....多谢!
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6楼2014-09-24 15:20:02
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