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鬼羽帝魂木虫 (著名写手)
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[求助]
大片段连接大载体难以连接的问题 已有4人参与
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最近做实验，大片段连接大载体。 载体、片段用相同的酶双酶切后回收，再连接。 （1）载体10000、片段4000，（2）载体12700、片段4334，改变体系做了3次。 第一次（1）长了1个，（2）长了好多，但是酶切验证都不对 第二次，第三次都没长单克隆。 连接时载体：片段为1:5，最大试过1:10，16度过夜或者8小时以上。 甚至，我连接酶都加了2ul（10ul的体系） 卡住了我在这，求指导，谢谢。 |
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zhenwuhuang
至尊木虫 (文学泰斗)
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【答案】应助回帖
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鬼羽帝魂: 金币+3, ★有帮助 2014-09-04 15:07:17
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鬼羽帝魂: 金币+3, ★有帮助 2014-09-04 15:07:17
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大片段连接pET-28a表达载体 http://muchong.com/html/201204/4322991.html |
15楼2014-09-04 12:02:19
2楼2014-09-04 09:13:23
鬼羽帝魂
木虫 (著名写手)
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3楼2014-09-04 09:15:06
huyan0817
木虫 (正式写手)
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4楼2014-09-04 09:52:00